测定NF-κB 活性

【求助】测定NF-κB 活性

参与者：sandy99

实验中设计测定NF－κB 活性，我查的资料有以下几种选择：

1、EMSA。请教所设计的标记探针的序列？以及该实验的注意事项。（没做过）

2、抽提核蛋白，用P65抗体做Western Blot.

请问性价比较高的，好做的是哪个公司的抗体？还有啊，如果这个抗体用FITC标记过，是不是就可以用来做激光共聚焦实验？也可做WB？

3、ELISA，贵，暂不考虑。

谢谢！

参与者：hwclove

我试着说一下我的看法：

1.EMSA中一般都是用P标记的探针，具有放射性，要是用生物素标记的话，放射性就小了，但是花的钱就多了。这个实验要是样本不多的话，大约花费4000左右吧，最重要的是放射性的问题，必须有磷屏，否则没法做。

2.首先说应该用磷酸化的P65抗体，一般都用santa cruz公司的。这个北京中杉代理，并且有分装的，420块钱100μl，你要是做得少的话可以选择分装的抗体。

3.还有就是免疫组化也是可以的。还有一种更好的方法就是promega的双荧光素酶报告系统，采用海肾和萤火虫两种荧光素酶，一种报告目的基因，一种报告内参，很好的方法，但是很贵。

总体来说，做EMSA和双荧光素酶是最好的方法，算是定量，但是EMSA有放射性，双荧光素酶比较贵。western和免疫组化只能用来半定量，但是做的人比较多，也能发高水平的杂志，相对来说比较简单，也省钱。