简介
测定己糖激酶活性对于了解细胞糖代谢的状态具有重要意义。 HK 是葡萄糖分解代谢途径中的第一个关键酶，催化葡萄糖转化为葡萄糖－6－磷酸。HK 共有 4 种同工酶，目前的研究主要集中于 HK I 和 HK II。葡萄糖－6－磷酸是糖酵解、磷酸戊糖途径、糖原合成和糖异生等代谢过程的交叉点。
原理
HK1 活性测定的基本原理是葡萄糖和 ATP 在 HK 催化下生成葡萄糖－6－磷酸和 ADP；在葡萄糖－6－磷酸脱氢酶（G6PDH）催化下和存在氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADP）时，生成葡萄糖－6－磷酸内酯和还原型 NADP（NADPH）。在 NADP 充足的条件下，NADPH 的含量变化与葡萄糖－6－磷酸含量变化成正比。由于 NADPH 在 340nm 处有最大吸收峰，检测 NADPH 的吸光度变化可反映出 HK 的活性。
材料与仪器
1、细胞样品或组织样品
2、细胞裂解液
3、生理盐水
步骤
HK1 活性测定的基本过程可分为如下几步：
① 细胞样品：收集细胞到离心管内，弃上清，按照每 10° 个细胞加入 200 μl 细胞裂解液，充分匀浆，8000 g 离心 10 分钟，取上清，置冰上待测；
② 组织样品：按每 10 mg 组织加入 100 μl 生理盐水的比例进行匀浆，4 ℃、8000 g 离心 10 分钟，取上清，置冰上待测；
③ 血清（浆）样品可直接进行检测。所有样品均应避免反复冻融而影响酶的活性。
注意事项
① 不同细胞、组织的 HK 活性差异较大，需进行预实验确定测量参数和样品稀释程度；
② NADPH 的分析受温度影响较大，检测反应液的温度必须保持 37 ℃ 恒温；
③ 某些试剂需要低温保存，避免变性和失活。
来源：丁香实验
