脂类组织化学与酶组织化学

脂类组织化学与酶组织化学

 

    脂类(lipid)是构成细胞 结构的成分之一，可分为脂肪(fat)和类脂(1ipoid)两大类。脂肪系指甘油三酯，以脂滴形式存在于细胞质内。类脂是一些与脂肪酸结合可形成酯的物质，包括胆固醇、固醇酯、磷脂和糖脂等。在组织化学上，根据染色性质不同可把脂类分为酸性脂类和中性脂类。酸性脂类包括脂肪酸和磷脂等，中性脂类包括甘油三酯、胆固醇、固醇酯、类固醇及某些糖脂等。

 

    显示脂类时常用甲醛作为固定剂。甲醛虽不能直接固定脂类，但能凝固脂类周边的蛋白质，使脂类保持在原位。钙离子有利于保存磷脂，故常用甲醛钙固定组织。但固定时间不宜太长，一般切片在染色前固定10分钟。组织块在室温下固定4小时或4℃ 24小时即可。如果固定时间过长，可使脂类水解，脂肪酸增加，甲醛也将被氧化而产生甲酸，固定液因此变酸而使脂类溶解。另外，含重铬酸钾和升汞等氧化剂均不宜作为脂类的固定液，以免脂类变性。

 

    显示脂类需采用冰冻切片，但是，已固定组织在冰冻切片时，其脂滴可被切片刀带离原位，移位到其他细胞的表面或者组织间隙内，观察时需要调节显微镜的焦距识别原位或移位脂滴。显示脂类不用石蜡切片的原因是因为制片过程中的有机溶剂可将脂类溶解。

 

    显示脂类最常用染料为脂溶性，可以溶于细胞脂滴内而显色。由于大部分为偶氮染料，具有p―羟基，能重排形成醌型结构使脂类呈现相应颜色。这类染料有苏丹黑B、苏丹Ⅲ和油红O等。如果标本在染色前用丙酮、苯或三氯甲烷等溶剂提取脂类，此类染料则失去染色特性，由此可以证实这些染料显示脂类的特异性。

 

    酶是生物体内具有催化作用的特殊蛋白质，存在于机体组织细胞的各个部位。人和动物体内的各种化学反应均由酶来催化。组织细胞中含有多种多样的酶类，但是所有这些酶类均不具有使其本身直接可见的特性，需要用某些组织化学方法在一定条件下将酶作用于底物，以底物分解产物作为反应物质，在原作用部位进行进一步反应，从而形成可见反应产物。这种通过显示酶催化活性，以验证酶的存在，同时进行定性、定位和定量研究的组织化学方法称酶组织化学(enzyme histochemistry)。酶的种类繁多，目前组织化学所能显示的酶有200多种。本节仅介绍几种常用酶的检测方法。

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