酶组织化学对组织处理的基本要求
互联网
1535
酶组织化学对组织处理的基本要求
在酶组织化学
研究中，仍需遵循标本制作五大基本步骤，即固定或不固定的标本、切片(冷冻或不冷冻)、孵育、显色和显微镜下观察。
根据组织化学酶检出的基本步骤。主要有以下5方面影响酶活性：
1．选择最适温度、pH及缓冲液。
2．固定和切片标本制作 由于固定液易使酶丧失酶活性，因此最好用不固定的冰冻切片显示酶活性。切片厚度一般为8～12um，不超过40um，因为切片在60um以上时，浸透速度减慢，易出现人工假象。
3．捕捉剂和激活剂 捕捉剂是形成最终产物的基本条件，有Pb2+
、Cu2+
和Ba2+
等，其中Pb2+
广泛应用于磷酸酶、酯酶和转移酶等酶反应。凡能提高酶活性的物质，称为激活剂。
激活剂分为三大类：
(1)离子：多为金属离子。一种激活剂对某种酶能起激活作用，但是可能对另一种酶起抑制作用；有时离子间也有拮抗现象，如Na+
抑制K+
的激活作用，Ca2+
抑制Mg2+
的激活作用等。
(2)小分子化合物：某些还原剂可提高酶活性，例如半胱氨酸和还原型谷胱甘肽等能使酶分子中的双硫键还原成硫氢基。
(3)激活酶：指可使某些无活性的酶原变为有活性的酶。
4．抑制剂 指某些物质在不引起酶蛋白变性的情况下，使酶活性减弱，甚至使酶活性消失。
5．对照实验 为确定被检酶是否具有特异性，以避免发生假阳性或假阴性结果，同时要进行对照实验。酶的性质是指对其相应的底物发生作用。如果有两种或更多酶作用于同一底物时，需要用以下方法进行酶反应特异性的对照实验。
(1)用酶的抑制剂确认酶活性的对照实验。
(2)除去底物对照实验：用去底物的孵育液进行反应。确认反应消失或明显减弱。
(3)阳性对照实验：用已确定有某种酶存在的组织细胞与待测组织同时进行反应，两者相互对照，以确认酶活性的存在。
