免疫组织化学基本原理

免疫组织化学基本原理

 

直接法

    直接法用酶或其他标记物标记的特异性抗体直接与标本中的相应抗原结合，再与酶的底物作用产生有色产物，沉积在抗原抗体反应的部位，即可对抗原进行定性、定位以至定量研究。直接法简便、快速且特异性强，非特异性背景反应低；其缺点是每种抗原必须分别用酶标记的特异性抗体，故很难获得各种市售标记特异性抗体。直接法敏感性较低，对组织或细胞内抗原量少的样品。难以达到检测目的。

免疫纽织化学直接法与间接法示意圈

三、间接法

    第一抗体 不标记，使用与第一抗体种属相同的抗体Fc段(有种属特异性)作为抗原免疫动物。制备抗抗体．即第二抗体，并标记第二抗体。例如，第一次使用的特异性抗体(一抗)是由家兔产生，则第二次使用的抗体(二抗)用酶标记或其他标记物标记抗兔的免疫球蛋白(常用酶标记羊抗兔lgG)。染色时，顺次以第一抗体和标记的第二抗体处理标本，在抗原存在部位形成抗原一第一抗体一标记的第二抗体复合物，以达到检测该抗原的目的。间接法因第二抗体的放大作用。敏感性大大增高。

 

三、亲豪和免负疫组织化学

    亲和免疫组织化学是从酶桥法和过氧化物酶―抗过氧化物酶复合物法(peroxidase-anti-  peroxidase complex method，PAP)发展而来。酶桥法的基本原理是将酶免疫动物，制备高效价且特异性强的抗酶抗体．然后用第二抗体作为桥，将抗酶抗体和特异性第一抗体(即连接在组织抗原上的抗体)连接起来．再将酶结合在抗酶抗体上．经过酶催化底物显色，从而显示出抗原所在的部位及含量。作为桥的第二抗体(即桥抗)必须对特异性抗体(一抗)和抗酶抗体均有特异性，这样才能将两者相连起来．因此，一抗和抗酶抗体应由同一种属动物产生。例如，特异性抗体和抗酶抗体均由兔产生，再用羊抗兔IgG作为桥抗将两者连接起来。  PAP法的基本原理与酶桥法相似，均是利用桥抗将酶连接在第一抗体结合的部位，所不同的是，先将酶(过氧化物酶)和抗酶(过氧化物酶)抗体(PAP)制成复合物，以代替酶桥法中的抗酶抗体和随后结合的酶，将两步合并为一步。这一重要的改进，不仅简化了操作步骤，而且大大提高了敏感性。PAP法的不足之处是反应步骤多，需时长，在实际操作中，会带来非特异性放大效应。亲和免疫组织化学结合了免疫酶组织化学在待检抗原部位形成有色沉淀和亲和组织化学能产生有效抗原信号放大系统的特点，使其敏感性大大增加，操作过程省时，背景清晰。因而成为目前应用最广的免疫组织化学方法。

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