免疫PCR(Immuno-PCR)概念和基础

（一） 免疫PCR技术的概念

免疫PCR是一种抗原检测系统，将一段已知序列的DNA片段标记到抗原抗体复合物上，再用PCR方法将这段DNA扩增，然后用常规方法检测PCR产物。

免疫PCR集PCR的高灵敏度与抗体和抗原反应的特异性于一体。其突出的特点是指数级的扩增效率带来了极高的敏感度，能检出浓度低至2ｎｇ/Ｌ的抗原物质，为现行任何一种免疫定量方法所不及。

（二） 免疫PCR体系的组成

免疫PCR体系由待检抗原，特异性抗体，连接分子，DNA和PCR扩增系统。

1．待检抗原  被检测的样品可以是抗原，或者是作为抗原的某种抗体。待检的抗原可以直接吸附于固相(包被抗原)，这一过程与ELISA试验是相同的.

2．特异抗体  免疫PCR中的特异性是对应于待测抗原，与ELISA一样，抗体的特异性和亲和力将影响免疫PCR的特异性和敏感性。一般均选用单克隆抗体，这个抗体常采用生物素标记，通过亲和或叶绿素再结合DNA。

3．连接分子  连接分子是连接特异抗体与DNA之间的分子。Sano等用链亲和素/蛋白Ａ(striptavidin-protein A)基因工程融合体作为连接分子来连接生物素标记的DNA与抗体，此种融合蛋白的链亲和素部分可识别DNA上的生物素，蛋白部分可识别抗体的Fc段。

4．DNA和PCR系统   免疫PCR中的DNA是一指示分子，用DNA聚合酶将结合于固相上的DNA特异放大，由此定量检测抗原。免疫PCR的敏感性多于ELISA主要是应用了PCR强大的扩增能力。免疫PCR中的DNA分子可以选择任何DNA，但要保证DNA的纯度，且有较好的均质性，尽可能不选用受检样品中可能存在的DNA。一般可选用质粒DNA或PCR产物等。DNA的生物素化是用生物素标记的dATP或dUTP通过聚合酶标记在DNA分子上，一般是1个分子DNA标记2个生物素，标记率可达百分之百。免疫PCR的PCR扩增系统与一般PCR一样，主要包括引物、缓冲液和耐热DNA聚合酶。

（三）免疫PCR产物的检测 

PCR扩增产物一般先用琼脂糖凝胶进行电泳，然后经嗅化乙啶染色，再照相记录PCR产物的电泳结果，通过底片上PCR产物的光密度可以得出PCR产物的量，即代表固相上吸附的待检抗原量，将其与标准抗原制备的标准曲线进行比较就可以准确地得出抗原的实际量。