一步实现单拷贝到高拷贝的转换---CopyControl克隆技术

<font>单拷贝 <u>克隆</u> 产量低，高拷贝 <u>克隆</u> 稳定性差，一直让研究者在 <u>克隆</u> 表达时难以选择。蛋白的表达就有诱导表达系统，可以实现人为地控制蛋白的表达时间和表达量——现在连质粒的拷贝数可以借助诱导的方法来人为控制了！Epicentre的专利技术——CopyControl <u>克隆</u> 系统能够让您共享单拷贝和高拷贝的优点。CopyControl <u>克隆</u> 首先以单拷贝形式生长——单拷贝可以确保插入稳定及成功 <u>克隆</u> 编码毒性基因序列——在需要的时候，再诱导成高拷贝 <u>克隆</u> ，以便下游应用所需。这一系统可以用来构建PCR <u>克隆</u> ，对于BAC，fosmid文库等大型质粒格外有用。 </font>

CopyControl 克隆 系统有两个重要的成分：
1．CopyControl pCC1 Vector.
这个载体含有两个复制起始位点（如图1）：单拷贝的大肠杆菌F-因子复制子，和诱导型的高拷贝oriV。 OriV的启动，需要trfA基因产物，trfA基因既不在pCC1 Vector上，也不在其他常规用来 克隆 的大肠杆菌菌株中，这个基因由CopyControl 的第二个重要元件—— TransforMax EPI300 E.coli菌株提供。

2．TransforMax EPI300 E.coli.
这是一个工程菌株，含有受诱导启动子严谨控制的trf A基因，在诱导表达的条件下可以提供启动oriV所需要的trf A基因产物。另外phage T1-resistant TransforMax EPI300-T1R E.Coli也可提供这个基因的产物。

<center> <table> <tbody> <tr> <td> <img src="http://img.dxycdn.com/trademd/upload/asset/meeting/2013/12/26/A1388040801.jpg" /> <div> 图1</div> </td> <td> </td> </tr> </tbody> </table> </center>

CopyControl 克隆 和 克隆 诱导步骤（图2）：

这个系统用于常规PCR 克隆 或者文库构建时，经过诱导，每个细胞中的质粒拷贝数可以从1个提高到200个，非常厉害，对于下游的表达或者核酸纯化、测序等都很有帮助。而对于BAC和Fosmid等低拷贝的大型质粒来说，单拷贝的 克隆 的稳定性是非常重要的考虑因素，经过诱导后每个细胞中质粒的拷贝数可以达到10—50个，对于后继的实验更有重要的意义。