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一步法

相关实验:总 RNA 提取实验

最新修订时间:

材料与仪器

RNA
乙酸钠 氯仿 异戊醇 异丙醇 乙醇 SDS 酚
离心机 分光光度计 摇床

步骤

1.  组织来源材料:100 ng 组织加1 ul 变性液,在玻璃Teflon匀浆器中将其匀浆。

2.  培养细胞:离心弃悬浮细胞培养液或倒去单层培养细胞培养液(不需用生理盐水洗涤),每107细胞加入1 ml 变性液,然后用吸管抽吸7~10次。
 
3.  将匀浆移入5 ml 聚丙烯管子,加入0.1体积的2 mol/l pH4.0的乙酸钠缓冲液,混匀。

4.  加入1 ml 水饱和酚,混匀;再加入0.2体积的49:1氯仿/异戊醇。

5.  混匀后0~ 4℃放置15 min。
 
6.  于4℃用SS-34转子10 000 g 离心20 min,将上层水相移入一个干净试管中。

7.  加入1 ml (等体积)异丙醇-20℃放置30 min 沉淀RNA,于4℃ 10 000 g 离心10 min。
 
8.  将RNA溶解于0.3 ml 变性液,并移入1. 5 ml 微量离心管中,加0.3 ml 异丙醇,。

9.  -20℃放置30 min 沉淀,于4℃ 10 000 g 离心10 min。
 
10.  重悬RNA沉淀于75%乙醇,旋起沉淀,室温放置10~15 min,10 000 g 离心5 min。

11.  真空干燥RNA 5~10 min,溶解沉淀于100~200 ul DECP此处理过的水或DEPC处理过的0.5%SDS,-70℃冰冻保存或保存在-20℃的乙醇中。

来源:丁香实验

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