提组织RNA

lxL4GM

2022-06-17

最近在提大鼠皮肤组织RNA，提完RNA后跑胶，显示没降解，浓度OD值也都还行，OD值1.9几，然后逆转录跑荧光定量，内参CT值都跑到二三十，目的基因更是跑到三四十，我用qpcr一步法试剂，发现比直接逆转录有改善，现在怀疑是苯酚和胍残留，抑制了逆转录过程，请问提RNA过程中应该怎样避免这种污染呢？用75%DEPC酒精多洗几次可以吗

3 个回答

bamboopiggy

2022-06-17

有帮助

你的od值，是260/230吗？如果不是，建议看一下260/230，这个值在1.8左右才好，感觉就是你测的rna的浓度虚高，导致内参CT值偏高。

秋秋欣欣

2022-06-17

有帮助

加入上清体积一半的无水乙醇试看

balalaLy

2022-06-17

有帮助

如果怀疑有试剂没有除干净可以从氯仿那一步重新走一遍