RNA抽提后出现奇怪情况

18 个回答

dxy_yhp416a0

2019-03-05

有帮助

Trizol提取鸡肝脏，用琼脂糖非变性胶电泳，会发现只有16S的条带（只能看到一条带），但是用甲醛变性胶电泳，28S和18S条带都在，和您这个情况有些类似。其实用Trizol提取没那么容易降解，况且你的5S RNA很亮（说明5S含量高），很完整（说明基本没有降解，如果28S已经降解到看不见的程度，那5S条带是不可能幸免的）。若怀疑试剂，提取流程或者电泳阶段发生降解，那随便找棵花花草草验证一下就可以

dxy_yhp416a0

2019-03-05

有帮助

首先，5S条带比较完整，28S和18S条带虽然不能观察到完整的条带，但是没有明显的拖尾，条带两端可以观察到被染色，但是没有观察到拖尾，所以出现降解可能性不大。由于Trizol对肝糖原缺乏特定的清除能力，所以Trizol提取的肝脏RNA容易混杂多糖污染，电泳时就常出现您这种情况，尤其使用非变性胶做电泳检测。建议做一个甲醛变性胶电泳看看，通常电泳结果会改善很多。

mingwang23

2014-10-06

有帮助

RNA有降解了，建议在操作过程中多注意RNA酶污染的问题！

木子枫叶

2014-10-06

有帮助

75%的乙醇最好也用高压过的DEPC水配制

神马很给力

2014-10-06

有帮助

主要考虑配胶的问题。胶没有充分混匀存在拖尾。RNA一般都会有降解。跑胶时间太长

SQLOVE

2014-10-06

有帮助

不同组织不同条件28S,18S,5S的比例不同，不能因5S亮就认为RNA降解了。但图中28S和18S跑出了很虚空心带，可能有一定降解。RNA在跑胶的过程中也会发生部分降解，最好缩短跑胶时间到10min，电压150V足够。

shgenwu

2014-10-06

有帮助

同意楼上，应该跑MOPS缓冲液的甲醛变性电泳才能看到28s：18s约2:1，而且RNA也要预先变性出来，不是直接跑DNA胶。

远古的早晨

2014-10-06

有帮助

暴露时间过长

ZhanLEE

2014-10-04

有帮助

这个好像是RNase降解RNA的节奏，最好能把电泳槽以及加样的所有器具用DEPC水浸泡一遍取出RNase，效果应该会好一点。

猪猪侠女

2014-10-04

有帮助

我之前也做出过这样的条带，感觉应该是降解了。跑胶的时间有点过长了

scrop_lamb

2014-10-02

有帮助

尝试重新提取并定量

cljjj2000

2014-09-24

有帮助

配胶的问题

DD_BB

2014-09-24

有帮助

测OD值不是更直接？

风中怅惘

2014-09-22

有帮助

我觉得主要问题不像是降解，降解肯定是有，但主要的问题是18S和28S的比例不对，应该是2倍关系，你这个看不大出来，降解的话会出现很明显的条带，5s太亮，另外貌似条带只有3条，不像是有杂质污染等（主要是DNA），可能的主要问题是操作中的丢失，建议严格操作步骤，低温离心，弃去上清液要注意，最后75%酒精处理要尽量在冰上风干，可以用枪头把多余的酒精引流出来，最后我觉得用1%的胶比较好，跑的时间短，降解的机会，程度都要小。