RNA抽提：加入异丙醇沉淀离心后出现的油滴类似物

最近利用trisol（Qiagen公司）进行肝脏病理标本RNA抽提，按照试剂的说明书进行操作：取小于50mg的RNAlater（Sigma公司）保存的样本，置于1ml的trisol中匀浆；

匀浆结束后室温放置5min左右，加入200ul氯仿，以振荡器剧烈震荡15秒混匀，室温或冰上（此处各家说法不一，我自己测试好像没有发现很大差异）放置5-10min；4度，12000g离心15min，吸取上清至新的1.5ml离心管中；在上清中加入等体积（一般加500ul）的异丙醇，颠倒混匀，室温静置5-10min；

4度离心，12000g，10min；此时应该出现一小片白色沉淀，紧贴管壁，去掉上清；加入1ml 75％乙醇洗涤，再次12000g离心（此处标准protocol为7500g，但我们一般用12000g）10min；小心去掉上清，晾干后加入50ul的DEPC 水并水浴促溶。整个过程就是这样。

现在问题是：在加入异丙醇后，原先是先出现乳白色的浑浊层，在颠倒混匀后，液体又回复澄清状，而现在是颠倒混匀后不能回复澄清状态，而是呈现乳浊液，离心后，在试管底部会发现看起来类似油滴状的东西，白色或者带点黄色，其体积跟样本的量是成大概正比的关系。

只要出现了这种东西，样本产生的RNA沉淀就无法贴壁，只有对着灯光，把油状物摇散了才能够看到里面的RNA沉淀，有时还会影响沉淀的形成，只有通过多次离心才能析出沉淀，昨天做的其中有三管离心离了三次才出沉淀，加起来有45min。这种东西乙醇清洗也不能去除，洗完后体积基本不变。

如果在加DEPC水之前，不把这种东西去除掉，跑出的胶图像经常是很亮的smear，或者是三条带，在28s的上面还有一条莫名其妙的带出现，而且带形非常不好。如果用枪尽量把这种东西吸除干净的话，结果并不能改善多少。试过酚氯仿重新抽提纯化，结果是几乎没有任何的改善。

这种情况之前碰到过，当时是用新鲜小鼠肝脏做的test，在试了各种方法无效之后，更换了trisol试剂，结果立刻就理想了，当时认为是trisol过期或者变质之类的原因。但这次trisol是新近购买的，才用了三四次而已。并且是在前一天做了一次test，结果非常好，但第二天就出现这种情况了，可以保证在使用过程中，试剂没有被污染。

打电话给一些公司技术支持，回答说没有碰到类似情况，但一个同事讲，他之前也碰到类似的情况，也试过酚氯仿重抽提，但没有效果，而且后面的RT-PCR之类的后续试验都做不出结果。总之是只要看到这种东西，整个试验全都废了。

想着把这种东西吸出来送到什么地方去检测其成分，但现在还没想出什么地方可以提供这种服务。这种东西应该不是普通的油烃，密度比水跟异丙醇的溶液要大，不知是否是氯仿。

现在想请教各位达人，是否有人碰到同样情况，如何才能避免，如果避免不了是否有什么可以补救的处理手段。