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总 RNA 提取实验

实验分类:

RNA 实验

最新修订时间:

简介

总RNA提取可以:(1)获得高纯度、高质量的总RNA;(2)可以满足生物学下游实验Northern Blot、核酸酶保护实验、RT-PCR、qRT-PCR 和阵列分析所需。

来源:丁香实验

操作方法

试剂盒快速提取法

一、细胞或组织破碎 1. 微生物材料 (1)发酵3~4天(或对数生长期)的菌体,离心收集菌丝体(动植物材料无需此步处理)。 (2)用经DEPC处理的水洗菌丝体2~3次,并尽量除去残存的水。 (3)加液氮充分研磨,使其成为粉末,以释放RNA。 (4)研磨后的样品转移至12 ml 变性液的容器中匀浆。 2. 动植物细胞培养材料 (适用的样品量为细胞:108) (1)细胞或组织培养:按常

氯化锂提取法

一、组织或细胞匀浆 1. 对于大量组织或细胞,则每克组织或细胞加入5~10 ml 氯化锂-尿素溶液,匀浆器高速匀浆2分钟。 2. 对于少量细胞(107个细胞/ml),则每克组织或细胞加入0.5 ml 氯化锂-尿素溶液手工匀浆,并转移至Eppendof管中。 二、纯化 1. 匀桨液在0~4℃放置4小时后,12 000 g 离心30分钟。 2. 取沉淀,加入原匀桨液1/2体积的氯化锂-尿素

CsCl法

一、 用于单层培养细胞 1. 室温下用PBS冼涤细胞,每平皿用5 ml,洗2次。 2. 在不超过108细胞中加入异硫氰酸胍溶液,并使之遍布整个平皿。 3. 用橡皮细胞刮子擦刮平皿,回收粘稠的细胞裂解液。 4. 用装有20-G针头的皮下注射器往返抽吸裂解物,并合并在一起。 二、用于悬浮培养细胞 1. 用JS-4,2转子离心回收≤108细胞,重悬于相当于1/2原有体积的PBS,并再次离心

一步法

1. 组织来源材料:100 ng 组织加1 ul 变性液,在玻璃Teflon匀浆器中将其匀浆。 2. 培养细胞:离心弃悬浮细胞培养液或倒去单层培养细胞培养液(不需用生理盐水洗涤),每107细胞加入1 ml 变性液,然后用吸管抽吸7~10次。 3. 将匀浆移入5 ml 聚丙烯管子,加入0.1体积的2 mol/l pH4.0的乙酸钠缓冲液,混匀。 4. 加入1 ml 水饱和酚,混匀;再加入0.

组织中 RNA 提取与检测

[图片]

培养细胞中 RNA 提取及检测

RNA 的提取通过变性剂破碎细胞或者组织,然后经过氯仿等有机溶剂抽提 RNA,再经过沉淀,洗涤,晾干,最后溶解。但是由于 RNA 酶无处不在,随时可能将 RNA 降解,所以实验中有很多地方需要注意,稍有疏忽就会前功尽弃。

组织块中 RNA 提取及检测

RNA 的提取通过变性剂破碎细胞或者组织,然后经过氯仿等有机溶剂抽提 RNA,再经过沉淀,洗涤,晾干,最后溶解。但是由于 RNA 酶无处不在,随时可能将 RNA 降解,所以实验中有很多地方需要注意,稍有疏忽就会前功尽弃。

真菌菌丝的总RNA的提取

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