一步法提取质粒DNA

一步法提取质粒DNA主要用于鉴定阳性克隆。

主要步骤如下：

收集1.5mL菌体，彻底除去培养基；

加入50ulSTE缓冲液重悬菌体；

加入50ul酚：氯仿;异戊醇（25：24：1），混匀；

12000rpm离心5分钟，取上清到另一离心管中；

加入NH4Ac至终浓度2M，并加入2倍体积的乙醇，混匀，室温或冰上放置几分钟；

12000rpm离心5分钟，弃上清，75%乙醇清沉淀；

沉淀干后，以水或TE缓冲液溶解，便可进行酶切等操作。

这种方法提到的质粒中，也有部分基因组DNA，但不影响酶切检测鉴定，但是某些要求严格的实验不能采用这种方法。