三种鉴定葡萄球菌凝固酶方法的评价

<center>  </center>

作者：张红升    作者单位：(安阳市人民医院，河南 安阳 455000)

［摘  要］ 目的：评价3种鉴定葡萄球菌凝固酶方法的敏感性和特异性。方法：临床分离的110株葡萄球菌，经革兰染色、触酶试验、ARIS2X鉴定后，用试管法、玻片法、商品乳胶血凝法（slidex staphkit）和凝固酶基因法，鉴定葡萄球菌和评价凝固酶试验方法。4种方法结果不一致的菌株进行重复试验。用凝固酶基因法作为“金标准”，比较其他3种凝固酶方法的敏感性、特异性。结果：凝固酶基因法能够正确判定葡萄球菌凝固酶；试管法有1株菌鉴定假阴性；玻片法有8株菌假定假阳性，2株假阴性；乳胶血凝法有2株假阳性。试管法、玻片法、乳胶血凝法的敏感性分别为98.53％、97.30％和100％；特异性分别为100％、77.78％和94.44％。玻片法鉴定葡萄球菌凝固酶有9.01％的错误。结论：乳胶血凝法和试管法敏感性和特异性较高，是鉴定葡萄球菌凝固酶试验的好方法，玻片法的特异性较差，可能是由于人血浆中产生的葡萄球菌抗体所致。

 

 

　　［关键词］ 葡萄球菌；鉴定方法；凝固酶；凝集因子

 

　　The Evaluation of 3 Kinds Methods Authenticating Staphylococci Coagulase

 

　　ZHANG Hongsheng

 

 

　　(The People Hospital of Anyang City, Anyang，He'nan 455000，China).

　　Abstract： Objective Evaluates it's sensitivity and particularity 3 kinds of staphylococci coagulas methods .Methods The method is clinical disjunctive 110 stub staphylococcus, after Gram stainhucker modification, Catalase test, ARIS2X authentication ,using the rube method ,the slide agglutination test method ,the sidex staphkit method and coagulase gene method, to authenticate staphylococci and evaluate coagulase test method. The strain will be test again if the result of 4 kind method are inconsistent. As the Coagulasegene method is a "gold standard", evaluate it's sensitivity and particularity lf the 3 kinds of coagulase methods .Results The Coagrlasegene method can authenticate staphylococci coagulase correctly ;There are 1 strain fake negative result by the tube method; 8 strains fake positive result ,2strain fade negative result by agglutination test method;2 strains fake positive result .It's sensitivity is 98.53％、97.30％and 100％,specificity is 100％、77.78％and 94.44％correspond with the tube method ,the slide agglutination test method, the slidex staph kit method and coagulase gene method. There are 9.01％ wrong result by using agglutination test method authenticating staphylococci. Conclusion It's good method to authenticate staphylococci coagulase test by the slidex staphkit method and the tube method with highly sensitivity and specificity .Otherwise ,the specificity of the slide agglutination test method is lower than the others ,perhaps it caused by staphylococci antibody in human plasm.

　　Key words：Staphylococcus;Authenticating method ;Coagulase clumping;Factor

　　血浆凝固酶试验是鉴别葡萄球菌的重要试验之一，凝固酶分为两种：游离型凝固酶、结合型凝固酶（凝集因子）。游离型凝固酶常用试管法鉴定，结合型凝固酶常用玻片法鉴定。近年来许多商家生产了各种鉴定凝集因子的试剂，如乳胶血凝试剂［1，2］。本文采用临床分离的110株葡萄球菌，以凝固酶基因法为金标准，评价3种葡萄球菌凝固酶的方法。

　　1  材料和方法

　　1.1  葡萄球菌来源  110株葡萄球菌分离自本院2004年4月至2005年4月临床患者的血、痰、尿、脓汁等分离、经ARIS2X细菌鉴定仪鉴定。

　　1.2  细菌鉴定  所有的菌株均进行革兰染色、触酶、凝固酶、ARIS2X细菌鉴定仪鉴定，方法参考［5］。

　　1.3  凝固酶试验  阳性质控菌ATCC 25923，阴性质控菌分离自临床经系统鉴定的表皮葡萄球菌。以下试验设有阳性和阴性对照。方法参考［4，5］。

 

　　1.3.1  试管法  兔血浆用生理盐水稀释4倍，取0.5 ml加被鉴定葡萄球菌数个菌落，混合后放35 ℃孵箱，3 h～4 h记录观察结果；若阴性，然后再放24 h，再观察记录结果。大多数金黄色葡萄球菌4 h内均可凝集，极少部分金黄色葡萄球菌须24 h出结果。

 

　　1.3.2  乳胶血凝法凝集试验  乳胶血凝试剂（slidex staphkit）BioMerieux产品，操作参照说明书。

　　1.3.3  玻片法凝集试验  将生理盐水1滴放在玻片上，取菌落数个放在其中混合，然后加1滴血浆，混匀后（1 min内）观察结果。

 

 

　　1.3.4  凝固酶基因法  采用PCR扩增法，检测凝固酶基因。引物设计：上游引物5'GGCGTTAAATAGAAGTGGTTCTGAAGATCCA3'，下游引物5'CTCTTTTTTCGCTTGTGCTTCACTTTTTCT3'，由上海生物工程公司合成。从过夜纯培养物中提取DNA，PCR扩增，94 ℃ 40 s，62 ℃ 40 s，72 ℃40 s共35个循环。然后取扩增产物15 μl加到1.5％琼脂糖凝胶中，电泳20 min，溴乙锭染色，紫外灯下观察。在450 bp处出现荧光区带为阳性结果，以上4种方法结果不一致的菌株，都进行重复试验。