改进碱性苦味酸法在血清肌酐测定中的应用

互联网2014-12-26

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作者：赖丽英，俞慧玲，王黎明作者单位：(1.江西省广丰县人民医院，江西广丰 334600;2.江西省玉山县中医院，江西　玉山 334700)

【摘要】目的：提高血清肌酐测定的准确性。方法：用双液体试剂中的RI液和标本进行反应，使胆红素氧化成胆绿素，再进行肌酐的测定，并与原法对比。结果：原法受胆红素的干扰，双液体两步法可有效消除胆红素的影响。结论：双液体两步法消除了胆红素对肌酐测定的干扰，操作简单，结果可靠，经济实用，适合推广。

【关键词】碱性苦味酸法;肌酐;胆红素

血清肌酐(CREA)测定是临床中常用的检测项目，也是急诊肾功能检测项目之一。血清肌酐值是评价肾小球滤过率(GFR)及诊断急性、慢性肾功能衰竭的有效指标。目前，我国临床<a target="_blank">实验室</a>测定血清肌酐的方法主要有两种：一类是碱性苦味酸法，另一类是酶学测定法。酶法试剂价格昂贵，尚不能达到普及，碱性苦味酸法是目前主要肌酐测定方法[1]。但这种方法的主要缺点是受高胆红素负干扰而致结果明显偏低，甚至出现负值。现将双液体试剂反应步骤进行了改进，把原来的一步法改为两步法，可有效地消除胆红素对肌酐测定的负影响。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 试剂：碱性苦味酸试剂(试剂R1：320 mmol/L氢氧化钠;试剂R2：35 mmol/L苦味酸，北京中生提供)。肌酐标准液、高、低定值质控血清由英国朗道提供。仪器使用日立7180型全自动<a target="_blank">生化</a>分析仪。

1.2 方法：①10 μl血清[总胆红素(TBIL)408 μmol/L]与200 μl试剂R1(320 mmol/L氢氧化钠)混合后，连续检测该混合物分别在510 nm和620 nm处吸光度的变化。结果发现48 s以后510 nm吸光度下降缓慢或基本不变，而620 nm处吸光度在32 s后上升缓慢或基本不变。胆红素被氧化成胆绿素的反应主要发生在标本和RI液混合后50 s以内。②根据上述发现并结合日立7180型全自动生化分析仪的特点，调整反应参数。10 μl血清与100 μl试剂R1(320 mmol/L氢氧化钠)反应16 s后加入100 μl试剂R2(35 mmol/L苦味酸)，在试剂R2加入后16 s读取起始吸光度(A1)，再过48 s读取终末吸光度(A2)，计算时用A2-A1=ΔA。肌酐的含量为:肌酐(μmol/L)=样品ΔA/标准ΔA×标准浓度(μmol/L)。主波长510 nm，副波长660 nm，反应温度37 ℃。