【旧帖整理】比较基因组杂交(Comparative Genomic Hybridization,CGH)
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CGH(比较基因组杂交): CGH用不同的荧光染料分别标记肿瘤基因组DNA(如spectrum-green-dUTP)和正常基因组DNA(如spectrum-red-dUTP),再以相同比例与正常人中期染色体杂交,然后测定沿染色体长轴的两种荧光信号的相对强度比值,通过肿瘤和对照DNA间荧光信号比值的差别找出肿瘤标本中异常DNA区域。正常染色体的绿红比率变化一般在0.85-1.15之间,超过此范围就是异常,若增加的倍数超过20个拷贝数则称为扩增。CGH主要用于检测肿瘤组织DNA拷贝数变化(缺失、复制、扩增),并能将这些异常在染色体上定位。该方法通过同一次实验即可扫描整个肿瘤基因组DNA序列的增加或丢失。(作者:hi1688)
比较基因组杂交(comparative genomic hybridization, CGH)技术是在染色体荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization, FISH)技术的基础上发展起来的一种新的分子细胞遗传学技术。其基本原理是:分别用不同的荧光标记体系标记来自待检组织和正常组织的全基因组DNA(分别称为测试DNA和参照DNA),各取等量标记产物制备成混合探针,与足够量的同一种属来源的Cot-I DNA先进行预杂交以封闭基因组上的重复序列,然后与正常中期分裂相进行染色体原位抑制杂交。测试DNA探针和参照DNA探针竞争性地与染色体上的靶序列杂交,经计算机软件分析, 将染色体上每一象素上测试DNA/参照DNA荧光强度的差异进行换算,以研究测试DNA拷贝数的增多或缺失。该技术不需染色体培养,一次杂交实验即可在整条染色体或染色体区带水平对不同基因组间DNA序列拷贝数的差异进行检测并定位。因此,一经报道,很快广泛应用于基因不平衡性的检测[1, 2]。随着生命科学与自然科学的发展以及学科交叉的不断渗入,各种技术之间的联合应用成为趋势。目前,一种将基因芯片和CGH相结合的新技术——微阵列-比较基因组杂交(microarray-CGH,又称arrayCGH)技术日趋成熟,并以其独特的优势而备受瞩目。(作者:chensy)
综述:微阵列—比较基因组杂交技术及其应用
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比较基因组杂交(comparative genomic hybridization, CGH)技术是在染色体荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization, FISH)技术的基础上发展起来的一种新的分子细胞遗传学技术。其基本原理是:分别用不同的荧光标记体系标记来自待检组织和正常组织的全基因组DNA(分别称为测试DNA和参照DNA),各取等量标记产物制备成混合探针,与足够量的同一种属来源的Cot-I DNA先进行预杂交以封闭基因组上的重复序列,然后与正常中期分裂相进行染色体原位抑制杂交。测试DNA探针和参照DNA探针竞争性地与染色体上的靶序列杂交,经计算机软件分析, 将染色体上每一象素上测试DNA/参照DNA荧光强度的差异进行换算,以研究测试DNA拷贝数的增多或缺失。该技术不需染色体培养,一次杂交实验即可在整条染色体或染色体区带水平对不同基因组间DNA序列拷贝数的差异进行检测并定位。因此,一经报道,很快广泛应用于基因不平衡性的检测[1, 2]。随着生命科学与自然科学的发展以及学科交叉的不断渗入,各种技术之间的联合应用成为趋势。目前,一种将基因芯片和CGH相结合的新技术——微阵列-比较基因组杂交(microarray-CGH,又称arrayCGH)技术日趋成熟,并以其独特的优势而备受瞩目。(作者:chensy)
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