SOUTHERN BLOT实验中，阳性和maker都能杂交出印记，基因组DNA为什么杂交不出来？

基因组DNA有用限制酶消化吗?基因组DNA因为太长，一般需要用限制酶消化成小片段，才能进行杂交

可能是因为阳性和marker都是经过处理后的DNA片段，而基因组DNA是未经处理的全长DNA，其中包含了大量不相关的序列，因此难以杂交出印记。在Southern blot实验中，需要将基因组DNA进行限制性内切酶切割和电泳分离，使得目标DNA片段与探针可以杂交形成印记。

探针的特异性（确认没有污染的情况下，是否能从基因组模板中扩增出探针条带），

基因组模板的质量（是否需要重新制备）

可能是本身dna序列浓度就比较低。或者基因组dna可能被消耗太多，导致目标序列消失。又或者dna存在较高的背景杂交。

在Southern Blot实验中，阳性探针和标记物都能够杂交出印迹，但基因组DNA却无法杂交出印迹的原因可能是以下几个方面：

1. 缺失或损坏的目标序列：基因组DNA可能存在缺失或损坏的目标序列，使得阳性探针无法与其杂交。这可能是由于基因组突变、插入或删除等基因组结构变化引起的。在这种情况下，即使存在目标序列，由于其结构异常，也可能导致杂交的不成功。

2. 低浓度的目标序列：如果基因组DNA中的目标序列浓度非常低，可能无法在Southern Blot实验中产生可见的杂交信号。这可能是由于低拷贝数的目标序列、低表达水平的基因或者其他技术上的问题所导致。

3. 消失的切割位点：Southern Blot实验通常需要将基因组DNA进行切割，以便于形成合适的片段大小进行杂交。如果目标序列周围的酶切位点发生了缺失或突变，可能导致无法得到适当大小的杂交片段。

4. 条件不合适：Southern Blot实验的成功还依赖于一系列实验条件，如电泳条件、杂交条件和探针的选择等。如果这些条件不正确或不适合特定的目标序列，也可能导致无法获得预期的杂交信号。

在面对这种情况时，你可以尝试采取以下策略来解决问题：

- 检查目标序列的完整性和存在性，可以使用其他方法如PCR或测序来验证目标序列的状态。

- 优化实验条件，包括电泳条件、杂交条件和探针设计等。

- 考虑使用不同的探针或其他检测方法，如PCR或测序，来确认目标序列的存在。

提高上样量，依旧杂交不出来可能是序列的互补度差