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southern blot

相关实验:Southern blot 实验

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dxy_fxg4t9c9

目前只有阳性质粒能杂交出来,maker有微弱的印记,样品完全没有,有人知道怎么回事嘛

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6 个回答

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是TTT

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增加上样量、增加探针浓度、如果这两者增加了依然没有条带,那就要换一种探针试试

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dxy_mqg1dtg8

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可能是样品浓度太低,或者样品DNA呗限制性内切酶完全切割,或者是探针的特异性不足。

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dxy_fxg4t9c9user-title

基因组DnA被完全酶切了,会怎么样啊,我是把一个载体插入到我的菌里,选的酶切位点是载体上有的,但是酶切位点不在探针的位置,

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毛利小五郎的徒弟

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marker显示不理想建议提高dna上样量重复测量,大部分都是误差原因

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沫子大大

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可能是样品中含有的目标序列太少或者不含有

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loveliufudan

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如果在Southern Blot实验中只有阳性质粒能够成功杂交出印记,而maker只有微弱的印记,而样品完全没有杂交信号,可能存在以下几种可能的原因:

1. 目标序列的拷贝数低:样品中的目标序列可能是低拷贝数的,即目标序列在基因组中的拷贝数非常有限。在这种情况下,杂交信号可能非常微弱,难以检测到。你可以尝试增加探针的浓度、增加杂交时间或使用更敏感的检测方法,以增加信号的强度。

2. 样品预处理不当:样品的DNA可能没有被适当地处理,导致目标序列无法在Southern Blot实验中被成功检测到。确保你在样品处理过程中使用了适当的酶切酶、缓冲液和处理时间,并根据目标序列的特点进行优化。

3. 样品DNA浓度不足:如果样品DNA的浓度过低,可能无法产生足够的信号来进行检测。确保你在实验中使用足够的样品DNA量,并考虑进行DNA扩增或浓缩来增加目标序列的浓度。

4. 实验条件不合适:可能存在实验条件方面的问题,例如电泳条件、转移条件、杂交温度和时间等。请确保你使用的条件是适合你的目标序列和探针的,并进行优化。

5. 引物或探针设计问题:如果你使用的引物或探针设计不合理,可能导致杂交信号的低强度或特异性不足。重新评估你的引物或探针设计,并确保其能够特异性地结合到目标序列上。

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balalaLy

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marker只有微弱的印记,是不是因为阳性质粒太带太明显,导致其它的显不出来?

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dxy_fxg4t9c9user-title

把阳性稀释了,条带很弱,可以杂交出来,但是样品还是不行

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