【求助】关于microRNA测定问题
丁香园论坛
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最近在研究心肌缺血对某microRNA的调控，有文献报道在原代细胞中随时间下调，我用的是H9c2心肌细胞系做的，想做个验证，顺便找最佳干预点。考虑经费问题，所以先用RT-PCR的方法做趋势，再上real time。我是提取总RNA，定量后（量和纯度都还好），用过茎环引物逆转录，再PCR电泳的，但做出的结果与设想趋势不符，且重复性很差，不知道哪里不对。麻烦高手指导下。
版主zhujoker留言:
RT-PCR这种半定量是不可能准确的，你的预试验没有任何意义！
RT-PCR这种半定量是不可能准确的，你的预试验没有任何意义！
其实做realtime的重复性就是不很好，所以每一次你一定要注意到溶解曲线的问题，当溶解曲线很好时，你的结果就稳定了。
RT-PCR条件是否稳定？这个问题你可以考虑一下。因为我看到过。然后，你看的文献权威性怎么样？有时候不要缺乏自信，很多新的理论与发现点都是在不经意中找到的。good luck !
谢谢，我在试试哈
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