【求助】请教给位站友，通过RNAi技术使基因不表达。希望各位站友多多帮忙。

站友们，你们好：
我们准备通过RNAi技术使成骨细胞的雌激素受体不表达（或表达减少）。由于从来没有做过这方面的实验，希望各位站友能简单给我们讲述这个过程，哪些是要请公司做的，哪些需要自己操作。需要什么特别的实验设备仪器。
据个人了解：
1，制备一种东西，能切除特定的基因。（如何制备？如何设置阳性和阴性对照？）

2，这种东西作用于细胞。（使用什么方法？）

3，检测细胞的基因是否有变化（设立通过PCR,WB等。）

4，还有什么其他的方法，可以使细胞的特定基因沉默？

祝：各位站友生活快乐，工作顺利。

附：RNAi（RNA干扰）技术通过双链RNA（dsRNA）引发转录后沉默，产生RNAi现象。该技术具有
高度的序列专一性，可使特定基因不表达，比反义RNA技术和同源共抑制更有效，更容易产生功能丧失或降低突变，目前已经成功地对上百种哺乳动物细胞目的基因进行功能分析，从而成为一种抑制体细胞功能基因翻译表达的有效工具。

我想问你一个问题，那就是成骨细胞的雌激素受体被knockdown之后细胞还能生存吗？如果行的话随便找个公司都能做好。这个不是很难的实验。

You want to have animal knock out or cell line? Virus transfection (Phoenix retroviral) would be fine

1 你可以利用invitrogen网站上的在线设计软件设计siRNA分子，将设计的序列送给合成公司合成
2 可以将合成的siRNA通过脂质体包裹转染如细胞内
3 通过RT-PCR和Wb检测目的基因mRNA和蛋白的表达情况
4 miRNA也可以，基因直接敲掉也可以

你可以看看WWW.BIOENW.COM，在这方面我们做的很多。jianxu@bioenw.com

RNAI干扰实验
1.干扰序列
可以选择文献 在线设计软件 公司设计等方式
2.目的基因表达水平验证
干扰之前 看一下目的基因的表达水平 如果比较高则可以进行干扰实验
3.成骨细胞是否是原代细胞？
通过细胞转染情况 选择三种干扰方式
A 化学合成
B。质粒
C。病毒等介导
4.验证靶点的有效性
目的细胞中验证有效性，先可以WB,毕竟干扰的目的是使蛋白减少的。但是有可能出不来结果。这个时候也未必是干扰序列无效。请用realtime验证。或者两则同时做。
5.干扰后表型
这个不知道了

你好！我们公司可以帮你做，有意请加QQ:594051497