【求助】有使用过试剂盒检测Rho活性的同仁吗？快来指导下我~~

　　试剂盒才买回来，是upstate的那个，rho activation assay kit研读说明书中，我以前从没做过pull down assay的，同实验室也没师兄师姐做过...所以，基本等于小白一个
　　问题是这样的，在rho pull down assay的这个步骤中，最后要求短暂离心收集管底物质。在免疫分析这一步又要求讲上清和琼脂糖珠混合，把我弄糊涂了，那前一步收集的管底物质是干什么的？
　　试剂盒很贵，实在不敢浪费，请大人们指教了~
附上说明书相关步骤的截图~

这个步骤就象IP一样，你可以找下关于IP assay方法学习下就知道什么意思了。

我去找了IP的方法学习，结果越学越糊涂，附上upstate这个试剂盒的说明书，希望能有人抽出时间看看，帮帮我这个菜鸟
问题还是在D.Rho pull down assay这一部分上，其中步骤2加Rho assay reagent（Rhotekin RBD，agarose），这个东西是不是就起到琼脂糖珠子的作用？
步骤8，离心后收集管底沉淀，收集的应该就是琼脂糖珠子吧？这个收集了之后有什么用呢？
然后，E部分的第一步，要求将上清和琼脂糖球混合用以电泳，那这个上清是哪来的上清呢？是不是D步骤中第8步离心后的上清？这里的琼脂糖球是指？
请达人给我具体讲讲这几步吧，困扰我好几天了~~~

Rho assay reagent应该是终止活性反应的。步骤8收集的是珠子，IP试验应该你看到了，珠子上有你需要的蛋白。E中所说的应该是收集的bead喝上清是上样缓冲液和bead的混合物。

谢谢楼上的~我看的关于IP的教程中，有收集珠子，用上清跑电泳的，也有把珠子和2xSDS上样缓冲液一起煮5min，一起跑电泳的...@_@
可能我太笨了，还是有些不明白，现在问题在E1，收集的珠子，到底是和D8中离心后的上清重新混合，还是和新的上样缓冲液混合呢？

我觉得是和上样缓冲液混合后的体系。

您的意思是新的上样？

简单的说就是将你收集的bead当做PAGE的样品。原来你如何做WB就按照步骤做就可以了。只是原来的样品是蛋白或者其他这里是bead而已。不知道你能明白我的意思否？