关于乳鼠心肌细胞培养的一点收获

在园子里浏览了很多次，发现关于乳鼠心肌细胞培养的资料还是几年前的比较多，不知道是不是这几年已经做得很少了。我是今年刚开始做的，发现虽然说方法已经很成熟了，但是做起来还是会有很多的问题的，所以把自己所犯错误总结如下：心肌细胞搏动差，取材后2、3天细胞活力明显下降。
当时我们一开始出现这个问题的时候，首先考虑是不是消化过度的问题，我们用的是0.1％的胰酶消化的，每次的时间都是6分钟左右（消化几次后，组织物少时会缩短时间），以前实验室做的时候也没有问题，后来改用0.08％的胰酶还是不行，又考虑是不是血清，我们用的是Hyclone特级胎牛血清，南美血缘的，考虑是不是不如北美血缘的好，又把实验室各种血清试了一遍，结果还是不好，又检查了CO2温箱的温度和湿度是不是稳定。我们把能换的东西都换了一遍，血清，胰酶浓度，培养板，CO2气，最终我们请教了另外的做心肌细胞培养的人，换用胰酶＋胶原酶II混合消化的方法，并且每次消化前都轻柔的吹打让组织充分和消化液混合，消化后也充分吹打后静置1－2分钟再吸上清，最后离心完成后，用培养基重悬沉淀是要充分吹打，以避免再下一步过滤时大量的丢失细胞。还要保证种板的密度，一般24孔板我们用2.5×105，每孔1ml，这样24h后就可以很漂亮的看到细胞搏动了，一般72h后搏动就是统一的频率了。
总结来说：
1.0.08％胶原酶II＋0.125%胰酶等比混合后消化
2.消化前后一定要轻柔吹打
3.重悬时要充分吹打，动作轻柔（100次）
4.种板密度要合适
5.当然血清，板都要进口，别图便宜
6.别忘了检查CO2温箱的情况
以上仅供学习参考，希望对大家有用