关于乳鼠心肌细胞的培养

丁香园网友roseluo425的观点为：

1、0.08％胶原酶II＋0.125%胰酶等比混合后消化

2、消化前后一定要轻柔吹打

3、重悬时要充分吹打，动作轻柔（100次）

4、种板密度要合适

5、当然血清，板都要进口，别图便宜

6、别忘了检查CO2温箱的情况

丁香园网友ljm123的观点为：

1、首先是选择乳鼠时最好是出生3天内的,以我的经验来看活力是较好的,皮肤看起来是暗红色的,再大一点的话,皮肤变厚,变白,不过也能养活,而且1个25CM2的培养瓶3只足够了.当然这里说的是SD的,昆明株的乳鼠就很难养活了,至少我做成功的次数很少,浪费了我不少时间.SD的差不多每次都会成功的.

2、我用的是胰酶,0.1%,大概4只乳鼠要消化10左右,每次4-5分钟,不能时间长,虽然时间长了,消化的快些,但是接种后很难存活,听说过加了胶原酶会好些,不过我没试过,主要是因为它太贵了,我们买不起.消化过和中会出现絮状物我的感觉是消化可能有些快了。

我的处理是如果样品足够多就可以将之丢去,样品少的话,可以先将所有的样品吸入另一新的离心管,重新在这个管字消化.将细胞悬液用5%血清培养液中止消化,而且一定得尽快中止.离心后再中止一次即可.离心我们选1000转4分钟.

3、关于血清我们用的是四季清的胎牛,180元一瓶,很便宜,进口的没用过,我们隔壁有人用2000元一瓶.这个和老板有没有钱有关系,要是有钱,我建议用进口的.我们用的是15%的浓度.(注意:终止液和培养液浓度是不同的,终止液没必要用那么高浓度,有点浪费)。

我们用高糖的DMEM,感觉不错.在这里我感觉最重要的培养液的PH值,尽量在7.2-7.4之间,刚开始我们还有仪器测,后来就观察颜色了,觉得不行就用HCL或NAOH调,大部是高,没有低的.所以NAOH没有用过.

4、离心管和瓶最好是用进口的,还要差速贴壁.细胞接种的浓度最好高些,宁可浪费一些.也不要让浓度太低,低了不容易活.这个本人觉得可能是细胞之间会产生某些刺激生长的东西,再说了,不管浓度高低肯定 会有一些死细胞存在的,死的细胞对活细胞的生长也是有害的,所以尽量接种浓度要高些.