人的外周血淋巴细胞培养实验

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细胞培养 （Cell Culture）专题：
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一、 实验目的

掌握人体微量血液体外培养制备染色体 标本的方法。

二、实验原理

人外周血液中的小淋巴细胞，几乎都处在G1期（G0期），一般情况下是不再分裂的，在培养液中加入植物凝血素（PAH）时，这种小淋巴细胞受刺激转化为淋巴母细胞，随后进入有丝分裂。这样经过短期培养，秋水仙素的处理，低渗和固定，就可获得大量的有丝分裂细胞。本方法已为临床医学、病毒学、药理学、遗传毒理学等方面的广泛应用。

三、实验材料

仪器设备

5毫升灭菌注射器，离心管，吸管，试管架，量桶，培养瓶，试剂瓶，酒精灯，烧杯，天平，离心机，恒温培养箱。

材料和试剂

1．人的外周血淋巴细胞。

2．Giemsa染色液原液：配方是0.5g Giemsa＋33ml甘油＋33ml甲醇。配制方法是：在研钵内先用少量甘油与Giemsa粉混合，研磨至无颗粒为止，再将其余甘油倒入，搅拌后56oC水浴保温2小时，再加入甲醇，搅匀后保存于棕色瓶中。

3．Giemsa染色液应用液：用0.1M pH7.4磷酸缓冲液稀释Giemsa染色液原液10倍。

四、实验步骤

1. 培养液的分装：在无菌室内或接种罩内，用移液管将培养液和其他各试剂分装入10毫升培养瓶中，每班8~10瓶，每瓶量为：

1640培养液4毫升

小牛血清1毫升

PHA0.2毫升

肝素0.05毫升

双抗（青霉素和链霉素）：终浓度为：100单位/毫升

pH：7.2~7.4用3.5%碳酸氢钠调节