人的外周血淋巴细胞培养实验
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掌握人体微量血液体外培养制备染色体标本的方法。
二、实验原理
人外周血液中的小淋巴细胞,几乎都处在G1期(G0期),一般情况下是不再分裂的,在培养液中加入植物凝血素(PAH)时,这种小淋巴细胞受刺激转化为淋巴母细胞,随后进入有丝分裂。这样经过短期培养,秋水仙素的处理,低渗和固定,就可获得大量的有丝分裂细胞。本方法已为临床医学、病毒学、药理学、遗传毒理学等方面的广泛应用。
三、实验材料
仪器设备
5毫升灭菌注射器,离心管,吸管,试管架,量桶,培养瓶,试剂瓶,酒精灯,烧杯,天平,离心机,恒温培养箱。
材料和试剂
1.人的外周血淋巴细胞。
2.Giemsa染色液原液:配方是0.5g Giemsa+33ml甘油+33ml甲醇。配制方法是:在研钵内先用少量甘油与Giemsa粉混合,研磨至无颗粒为止,再将其余甘油倒入,搅拌后56 o C水浴保温2小时,再加入甲醇,搅匀后保存于棕色瓶中。
3.Giemsa染色液应用液:用0.1M pH7.4磷酸缓冲液稀释Giemsa染色液原液10倍。
四、实验步骤
1. 培养液的分装:在无菌室内或接种罩内,用移液管将培养液和其他各试剂分装入10毫升培养瓶中,每班8~10瓶,每瓶量为:
1640培养液4毫升
小牛血清1毫升
PHA0.2毫升
肝素0.05毫升
双抗(青霉素和链霉素):终浓度为:100单位/毫升
pH:7.2~7.4用3.5%碳酸氢钠调节