免疫组化之sp法操作步骤

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SP(streptavidin-perosidase)法，即链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结法。

按标记物质的种类，如荧光染料、放射性同位素、酶(主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶)、铁蛋白、胶体金等，可分为免疫荧光法、放射免疫法、酶标法和免疫金银法等。按染色步骤可分为直接法(又称一步法)和间接法(二步、三步或多步法);按结合方式可分为抗原 -抗体结合，如过氧化物酶-抗过氧化物酶(PAP)法和亲和连接，如卵白素-生物素-过氧化物酶复合物(ABC)法、链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结(SP)法等，其中SP法是最常使用的方法。

一般的sp法步骤啊，具体如下：

1、烤片，68℃，20分钟，

2、常规二甲苯脱蜡，梯度酒精脱水;二甲苯I20min⇒二甲苯II20min⇒100%酒精10min⇒100%酒精10min⇒95%酒精5min⇒80%酒精5min⇒70%酒精5min

3、阻断灭活内源性过氧化物酶：3%H2O237℃孵育10min，PBS 冲洗3X5min;

4、抗原修复：置0.01M枸橼酸缓冲液(PH6.0)中用煮沸(95℃，15-20min)，自然冷却20min以上，再用冷水冲洗缸子，加快冷却至室温，PBS冲洗3X5min。

5、正常羊血清工作液封闭，37℃10min，倾去勿洗。

6、滴加一抗4℃冰箱孵育过夜，PBS冲洗3X5min(用PBS缓冲液代替一抗作阴性对照);

滴加生物素标记二抗，37℃孵育30min，PBS冲洗3X5min;

7、滴加辣根过氧化物酶标记的链霉素卵白素工作液，37℃孵育30min，PBS冲洗3X5min;

8、DAB/H2O2反应染色，自来水充分冲洗后，

苏木素复染，常规脱水，透明，干燥，封片。