ELISA法因孵育时间不同使丙肝抗体假阳性误判

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杨晓芳 张英（新疆昌吉州人民医院检验科　新疆昌吉　831100）

【关键词】ELISA法孵育时间丙肝抗体假阳性

酶联免疫吸附试验(ELISA)，以其操作简便、快速、灵敏度高、特异性好之特点。被广泛应用于临床诊断，是目前检验科用于各类传染病指标大批量标本检测的主要方法，也是丙肝抗体常用的检测方法，但由于酶联免疫吸附试验(ELISA)，在检测过程中影响因素诸多，会出现假阳性反应，现将ELISA两步法由于孵育时间不同，而导致假阳性结果报道如下：

1　材料和方法

1.1标本来源本院住院病人血清。用真空采血管采集病人全血5mL，3000转离心15分钟。分离出血清备用

1.2试剂酶联免疫试剂盒为：北京金豪制药股份有限公司提供（批号20100812，20102165）

上海科华生物工程股份有限公司（批号201012021）

中山达安基因有限公司（批号2010004）

1.3仪器美国宝特Bio-TekELX800型酶标分析仪。英国INTEC公司INTEC1000洗板。

LightCycler型核酸扩增荧光检测仪。

1.4方法病人标本常规用北京金豪试剂盒检测（批号20100812），严格按操作说明书进行操作。第一种方法用A表示：设一空白对照孔，只加标本稀释液，两个阴性对照孔，两个阳性对照孔，加阴阳性对照100UL，每个检测孔先加100UL标本稀释液，再加待检血清10UL，37度孵育20分钟，洗版后每孔加酶结合物（空白不加），37度孵育20分，洗版后每孔加显色剂50UL，37度10分钟孵育，加终止液50UL。比色。结果OD值为1.268，cutoff值为0.196，为阳性。

第二种方法用B表示（试剂盒批号20102165），设一空白对照孔，只加标本稀释液，两个阴性对照孔，两个阳性对照孔，加阴阳性对照100UL，每个检测孔先加100UL标本稀释液，再加待检血清10UL，37度孵育60分钟，洗版后每孔加酶结合物（空白不加），37度孵育30分，洗版后每孔加显色剂50UL，37度30分钟孵育，加终止液50UL。比色。结果OD值为0.075，cutoff值为0.260,为阴性。通知病房重新采集病人标本。方法相同，重复以上实验。A方法检测结果OD值为1.51，cutoff值为0.226。B方法检测结果OD值为0.065，cutoff值为0.261。与前一天检测结果相符。改为上海科华试剂检测。同时做丙肝RNA病毒检测。 2　结果

2.1A方法检测结果为阳性。B方法和上海科华试剂盒检测结果为阴性。

2.2丙肝RNA病毒检测结果为低于检测下限。

2.3按阴性报结果，建议病人定期随访。

3　讨论

丙肝是一种很严重的疾病，在我国慢性丙肝已经成为引发肝硬化，肝癌的常见且最重要的病因之一。丙肝抗体是目前临床诊断丙型肝炎感染的一个重要的血清学指标，但目前的丙肝抗体ELISA试剂盒有一定的假阳性率。从以上实验可以看出，此检测结果为一典型假阳性。而且OD值不属于弱阳性值。已接近阳性高浓度值。丙肝抗体检测影响的主要因素有：1）类风湿因子的干扰，RF有一个特点，即可与变形的IgG产生非特异性结合。因此，在丙肝抗体检测中如果血清中存在RF,可与固相上的IgG和酶标的IgG结合而出现假阳性。2）高免疫球蛋白血症，血清标本中含有非特异的IgG，可能会致其非特异性的吸附固相表面，从而与后加的酶标抗人IgG结合，造成假阳性。3）标本中超氧化物歧化酶（SOD）的干扰。如标本中SOD升高，可造成假阳性结果。4）用于固相包被的HCV基因工程抗原不纯[1]。2010年10月1日起执行的，《中华人民共和国药典》对于酶联免疫检测试剂盒提出了更高的要求，增加试验步骤，延长孵育时间，即加标本后孵育时间为1小时，加酶后孵育时间为30分钟，显色孵育时间为30分钟。使抗原抗体得到充分反应，通过技术革新提高了实验室诊断的灵敏度和特异性。本实验中A方法为旧“二步法”，B方法为新“二步法”。此标本检测时正好是新旧试剂交替过程中。所以及时发现。没有造成误报。从试验中也可以看出，新“二步法”试剂的使用提高了真阳性的检出率，降低了假阳性率。从本次试验也可提醒检验工作者，丙肝抗体检测影响因素较多，报告阳性结果时，一定要慎重。要考虑假阳性结果的可能性。尤其是OD值不属于弱阳性的值。如出现阳性结果，最好换一种品牌的试剂复检。虽然增加了工作量，增加了试剂成本，但避免了假阳性误报，也减少了医患纠纷，避免给患者造成不必要的伤害。在检测过程中，如果必要时建议患者做丙肝RNA检测。对结果进行确认。或者建议患者定期随访。