动物肝脏中DNA的制备

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一、实验目的：
学习并掌握动物组织总DNA的提取方法及其原理。

二、实验原理:
要获得纯的DNA样品，必须考虑以下几点：
¾如何选材，如何破碎组织细胞？
¾如何除去蛋白质？在真核细胞内，DNA与蛋白质结合成核蛋白的形式存在。因此，分离DNA时必须使其与蛋白质解离，并除去蛋白质。
¾设法除去RNA的污染；
¾防止DNA酶的降解作用；

(一)选材
要提取动物组织DNA，一般选择细胞膜 较脆弱，容易破碎的动物脏器，如胸腺、肝脏、脾脏、胰脏、精子等。

(二)细胞破碎方法—机械物理法：
•研磨：将剪碎的动物组织置于研钵或匀浆器中，加入少量石英砂研磨或匀浆，破碎细胞。这种方法温和，适合实验室使用。
•组织捣碎器：较剧烈的破碎细胞的方法，为了防止发热和升温过高，通常是转10秒—20秒，停10秒—20秒，可反复多次。
•压榨法：在1000×105Pa—2000×105Pa 的高压下使几十毫升的细胞悬液通过一个小孔突然释放至常压，细胞将彻底破碎。温和的、彻底破碎细胞的方法，但仪器费用较高。(少量细少量细胞可用French press,大量可用Manto-gaulin
•反复冻融法：将待破碎的细胞冷至－15℃到－20℃，然后放于室温(或40℃)迅速融化，由于细胞内形成冰粒使剩余胞液的盐浓度增高而引起细胞溶胀破碎。
•超声波处理法：借助超声波的振动力破碎细胞壁和细胞器 。使用时注意降温，防止过热。
•冷热交替法：在90℃左右维持数分钟，立即放入冰浴中使之冷却，如此反复多次，绝大部分细胞可以被破碎。
组织捣碎匀浆机