苏木精-伊红染色方法,简称 HE 染色方法,是生物学和医学的细胞与组织学最广泛应用的染色方法。在病理学实验室中称为常规染色方法。病理细胞和组织学的诊断,教学和研究都是用 HE 染色方法观察正常和病变组织的形态结构。因此病理学工作者必需学习和掌握这种染色方法。
一、HE 染色的基本原理
1、细胞核染色的原理
细胞核内的染色质主要是去氧核糖核酸(DNA),DNA 的双螺旋结构中,两条链上的磷酸基向外,带负电荷,呈酸性,很容易与带正电荷的苏木精硷性染料以离子键或氢键结合而染色。苏木精在碱性染料中呈蓝色,所以细胞核被染成蓝色。
2、细胞浆染色的原理
细胞浆内主要成分是蛋白质,在染液中加入醋酸使胞浆带正电荷(阳离子),就可被带负电荷(阴离子)的染料染色。伊红 Y 是一种化学合成的酸性染料,在水中离解成带负电荷的阴离子,与蛋白质的氨基正电荷(阳离子)结合而使细胞浆染色,细胞浆、红细胞、肌肉、结缔组织、嗜伊红颗粒等被染成不同程度的红色或粉红色,与蓝色的细胞核形成鲜明的对比。伊红是细胞浆的良好染料。
随着科学技术快速发展和电子计算机的广泛应用,染色自动仪器的出现,许多实验室已用全自动染色机代替人工染色。
二、人工操作苏木精伊红染色方法
1、染色步骤
二甲苯 I 脱蜡 10 min.
二甲苯 II 脱蜡 5 min。
无水乙醇洗去二甲苯 1 min × 2 次。
95% 酒精 1 min。
90% 酒精 1 min。
85% 酒精 1 min。
自来水洗 2 min。
苏木精染色 1 min 至 5 min。
自来水洗 1 min。
1% 盐酸酒精分化 20 s。
自来水洗 1 min。
稀氨水(1%)反蓝 30 s。自来水洗或蒸馏水洗 1 min。
伊红染色 20 s 至 5 min。
自来水洗 30 s。
85 % 酒精脱水 20 s。
90 % 酒精 30 s。
95%I 酒精 1 min。
95%II 酒精 1 min。
无水乙醇 I 2 min。
无水乙醇 II 2 min。
二甲苯 I 2 min。
二甲苯 II 2 min。
二甲苯 III 2 min。
中性树胶或加拿大树胶封片。
2、染色结果
细胞核呈蓝色,细胞浆、肌肉、结缔组织、红细胞和嗜伊红颗粒呈不同程度的红色。钙盐和各种微生物也可染成蓝色或紫蓝色。
三、染色液的配制
1、苏木精(素)
苏木精是一种纯天然染料,是从苏木素树提炼出来的,苏木树主产墨西哥的坎偑切,苏木精的染色性能差,经过一百多年精心加工配制,现用的苏木精配方,染色性能好,保持时间长,是世界上唯一的常规细胞核染料,
2、苏木精的配制
苏木精的配方很多,可根据不同需要选用,Harris 配方最常用。
(1)Harris 苏木精的配制
苏木精 1 g
硫酸铝钾 15 g
无水乙醇 10 ml
蒸馏水 200 ml
先用蒸馏水加热溶解硫酸铝钾,用无水乙醇溶解苏木精再倒入已溶解的硫酸铝钾蒸馏水中,煮沸 1 min 后,稍冷却,慢慢加入红色氧化汞 0.5 g,继续加热至染液变为紫红色,用纱布盖瓶口,用前滤纸过滤后每 100 ml 加冰醋酸 5 ml。
(2)Mayer 苏木精改良配法
A 液
苏木精 2 g
无水乙醇 40 ml
B 液
硫酸铝钾 100 g
蒸馏水 600 ml
稍加热使硫酸铝钾在水中溶解,将苏木精溶于酒精中,再将 A 液与 B 液混合煮沸 2 min。用蒸馏水补足 600 ml,加入 400 mg 碘酸钠充分混匀,苏木精染液呈紫红色。
(3)Gill 改良苏木精染液的配制
苏木精 2 g
无水乙醇 250 ml
硫酸铝钾 17 g
蒸馏水 750 ml
碘酸钠 0.2 g
冰醋酸 20 ml
先将苏木精溶于无水乙醇,再将硫酸铝钾溶于蒸馏水中。两液溶解后将其混合,加入碘酸钠待苏木精氧化成紫红色,再加入冰醋酸。
3、伊红溶液的配制
(1)水溶性伊红
伊红 Y 0.5-1 g
蒸馏水 100 ml
先将水溶性伊红加入蒸馏水中,用玻璃棒将伊红搅起泡沫后过滤,每 100 ml 加冰醋酸1滴。
(2)乙醇性伊红液的配制
伊红Y 0.5~1g
90%酒精 100 ml
先将伊红溶于酒精中,用玻璃棒研碎溶解后,每 100 ml 加冰醋酸1滴。用乙醇性伊红液染细胞浆后不可经水洗直接用 85% 酒精脱水。
4、盐酸酒精分化液的配制
浓盐酸 0.5~1 ml
75% 酒精 99 ml
此液用一段时间后需要延长或更换液体,新液分化时间要短。
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