材料与仪器
水化并显影的原位杂交玻片
苏木精染料(用乙酸处理的Harris改进苏木精 无汞) 0. 1%氢氧化铵 伊红染料
玻璃染色盘
苏木精染料(用乙酸处理的Harris改进苏木精 无汞) 0. 1%氢氧化铵 伊红染料
玻璃染色盘
步骤
1) 将显影过的载玻片(在玻片架中)放入盛有水的染色盘中。
2) 在染色盘中准备以下各组液体:
1个盘: 苏木精染液
2个盘: 水
1个盘: 0.1%氢氧化铵
2个盘: 水
1个盘: 伊红染液
1个盘: 95%乙醇
2个盘: 100%乙醇
3个盘: 二甲苯
3) 在苏木精染液中染玻片20〜30 s,勿染过深。水中浸泡2次,每次2 min。
4) 快速浸于0.1%氢氧化铵,然后浸入水中。
如果在0.1%氢氧化铵中浸泡时间过长,放射自显影乳胶会从玻片上脱离。
5) 以水浸洗5 min,然后用伊红染色20〜30 s。
如染色过深,可将玻片浸于50%乙醇中,脱色片刻(观察染料扩散状况);如染色过弱,可再染。
6) 在同一盛95%乙醇的盘中,浸洗玻片8次,然后,于100%乙醇中浸8次,再置 100%乙醇中2 min使完全脱水。在二甲苯中平衡3次,每次2 min。
7) 按基本方案步骤5〜9操作,进行固片处理。
来源:丁香实验