放射自显影原位杂交玻片的复染和压片固定实验

生物化学实验

最新修订时间：2022-02-10

简介

通过轻微的切片复染，可观察切片样本的形态以及特异区域的特性。复染后，载玻片经脱水处理，压盖玻片固定，拭净后供显微镜观察。在所提供的以下方案中，吉姆萨染色在染细胞核上占有优势，苏木精/伊红染色可辨别细胞核和细胞质，甲苯胺蓝染色是对细胞核和细胞质淡染的一个更简便方法。细胞核的Hoechst染色提供了一个可同时观察整个组织以及杂交区域的快速、简便、有效的途径。

来源：丁香实验

操作方法

姆萨 (Giemsa) 染色

1) 将显影的玻片置于玻片架上，浸入盛有水的染色盘中。2) 在染色盘中，准备以下各组液体：1个盘：用pH 6.8 10 mmol/L磷酸钠缓冲液配制的25倍稀释的吉姆萨染液；3个盘：水。脱水系列溶液（可重复使用）：3个盘：分别盛50%、70%和95%乙醇；2个盘：盛有100%乙醇；3个盘：盛有二甲苯。3) 在25倍稀释的吉姆萨染液中染玻片20 s (依染色时间决定染色的强弱）。将玻片在水中浸泡3次

苏木精/伊红染色

1) 将显影过的载玻片（在玻片架中）放入盛有水的染色盘中。2) 在染色盘中准备以下各组液体：1个盘：苏木精染液2个盘：水1个盘： 0.1%氢氧化铵2个盘：水1个盘：伊红染液1个盘： 95%乙醇2个盘： 100%乙醇3个盘：二甲苯3) 在苏木精染液中染玻片20〜30 s，勿染过深。水中浸泡2次，每次2 min。4) 快速浸于0.1%氢氧化铵，然后浸入水中。如果在0.1%氢氧化铵中浸泡时间过

甲苯胺蓝染色

1) 用水稀释甲苯胺蓝染液。按所期望染色程度，凭经验决定稀释度，由1:100稀释起始。2) 玻片在稀释好的染色液中短暂浸泡，然后在水中浸泡数次。按需求进行压片固定。