细胞培养板的选择和使用

细胞培养板作为培养细胞的一种常用和重要的工具，形状、规格、用途多样，你是否也为如何选择适合的培养板而迷茫？你是否正为如何方便、正确的使用培养板而苦恼？你对如何处理培养板是否也有困惑？对不同的培养板各有什么妙用你又有何体会？

细胞培养板的选择：

细胞培养板依底部形状的不同可分为平底和圆底（U型和V型）；培养孔的孔数有6、12、24、48、96、384、1536 孔等；根据材质的不同有Terasaki板和普通细胞培养板。具体选择时根据培养细胞的类型、所需培养体积及不同的实验目的而定。

（一）平底和圆底（U型和V型）培养板的区别和选择：

贴壁细胞一般用平底培养板。

悬浮型细胞的培养一般用V型。

U型培养板亦多用于培养悬浮型细胞 。

V型培养板有时用做免疫学血凝集的实验。

不同型狀的板子自然有不同用途。平底的什麼類型的細胞都可用﹐但當細胞數目較少﹐如做克隆時﹐就用96孔平底板﹐另外﹐做MTT等實驗時﹐無論貼壁和懸浮細胞﹐一般均用平底板。至於U或V型板﹐一般在某些特殊要求時才使用。如在免疫學方面﹐當做兩種不同淋巴細胞混合培養時﹐需要二者相互接觸以刺激﹐因此﹐一般需要U型板﹐因細胞會由於重力的作用而聚集在一個很小的範圍內。V型板的用途更少﹐一般用于細胞殺傷實驗時﹐為了使效靶細胞緊密接觸﹐常使用V型板﹐但這種試驗也可用U型板替代(加入細胞後﹐低速離心)

如果是養細胞的話， 通常是選用平底的， 另外要特別注意材質， 標示"Tissue Culture (TC) Treated"就是養細胞用的。

圓底的好像沒聽說過拿來養細胞。 圓底的通常是拿來做分析， 化學反應， 或是保存樣品用的， 因為圓底比較好將液體吸得乾淨， 如果用平底的就不好吸了。 不過， 如果你是要測吸光值的話， 一定要買平底的才行。

大部分细胞培养都用平底培养板，便于镜下观测、有明确的底面积、细胞培养液面高度相对一致，还便于MTT检测。

圆底培养板主要用于同位素掺入的实验，需要用细胞收集仪收集细胞的培养，如“混合淋巴细胞培养”等。

（二）问题集锦

问：我看到培养板有4、6、12、24、48、96孔几种规格 ，但不知道到底什么实验用哪种规格，请指教。

答：要根据你具体的实验要求，流式一般用6孔，MTT一般用96孔，细胞爬片一般用24孔等！要具体根据你实验来定！

问：请问哪位高手知道Terasaki板是什么培养板，与普通细胞培养板有什么区别？谢谢！！

答：Terasaki plate主要是用于晶体学研究，产品设计便于对晶体的观察与结构分析。有两种sitting 和handing drop两种方法，两种方法应用产品的外形结构也不同。材料上选择crystal class polymer ，特殊的材料有利观察晶体结构。

问：我想测吸光度用酶标仪，用多孔细胞培养板行吗？请问酶标板 多孔细胞培养板有什么区别？

答：用多空细胞培养板测吸光度肯定可以拉，我们经常用它来做样品的蛋白定量和MTT检测。

区别：酶标板一般要比细胞培养板贵，细胞板主要做细胞培养，但也可以用来测蛋白浓度；酶标板包括包被板和反应板，一般不能用做细胞培养，它主要做免疫酶联反应后的蛋白检测，它需要更高的要求还需要特定的酶标工作液。如下是个用酶标板检测冠状病毒IgM/IgG抗体例子：

【操作步骤】

1．加样品：将标本稀释液100ul（或2滴）加到包被板内（预留阴阳性及空白对照2－5孔），将待检血清用PBS或生理盐水按1：20稀释后取10ul加入反应孔内。

2．加对照：加入阴性对照1－3孔，阳性对照1孔，各100ul对照血清。空白对照1孔空置。

3．温育：将反应板震荡使样品混匀后，置37℃温箱或水浴反应20分钟。

4．洗板：用蒸馏水将浓缩洗涤液15ml稀释至300ml。

（1）手洗：将反应板孔内容物倾出，将洗涤液注满反应孔，放置30秒钟后用力甩去，如此重复5次后拍干。

（2）机洗：5次，每孔注入洗涤液200ul或注满，停留30秒钟后吸尽拍干。

5．加酶标工作液：每孔加入100ul（或2滴）酶标工作液，置37℃温箱反应20分钟后，洗板5次，洗板操作同步骤4。

6．显色和终止反应：将底物A、B液各50ul（或1滴）加到反应孔内，37℃避光显色10分钟。每孔加入终止液50ul（或1滴）混匀终止反应。

【结果判定】

1．酶标仪设定波长450nm，先用空白调零，然后测定各孔OD值；如果选用双波长测定，不必设置空白对照孔。

2．当阴性对照平均OD值小于0.08，阳性对照（pc）OD值大于0。30时，说明试剂盒有效且实验操作正确，否则应当重复试验。

3．临界值（CUT—OFF VALUE）＝0.15＋阴性对照平均（NC）OD值（当阴性平均OD值小于0.05时，按0.05计算；当阴性平均OD值大于或等于等于0.05时按实际值计算）。

4．标本OD值≤临界值为阴性，标本OD值>临界值为阳性。

常用不同培养板的孔底面积及推荐加液量：不同孔板所加培养液的液面都不宜太深，一般在2-3mm范围，结合不同孔的底面积就可算出各培养孔的适宜加液量。若加液量过多会影响气体（氧气）交换，而且在搬动过程中易溢出造成污染。具体所加细胞密度依实验的目的不同灵活掌握。

培养器皿   面积（cm²）培养液量（ml）  细胞量

96 孔培养板  0.32  0.1   10e5

24孔培养板  2  1.0   5×10e5

12孔培养板  4.5  2.0   10e6

6孔培养板  9.6  2.5   2.5×10e6

3.5 cm 培养皿  8  3.0   2×10e6

6 cm 培养皿  21  5.0   5.2×10e6

10 cm 培养皿  55  10.0   13.7×10e6

25cm² 培养瓶  25  5.0   5×10e6

75cm² 培养瓶  75  15～30   2×10e7