质粒转染细胞
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pl198242:请问各位大侠:用质粒提取试剂盒从大肠杆菌中提取质粒后,想用于细胞转染,还需要另外的操作来除菌么? 另外是否还需要纯化?
丁香园网友boboyuan认为:
不需要,当然,前提是你提取质粒时操作是规范的。
提完的质粒放-4度保存,转染的时候直接用就行了。
丁香园网友hzh_0796认为:
看你是用什么方法提得,纯度如何
我用小提的时候发现,最后一步用洗脱液洗时将吸附柱放进一个新的EP管时盖子居然盖不上,硬着头皮这样拿去离心,自己都不放心用。后面测了下浓度好低,只有89微克每毫升。看来小提只适合酶切测序等。
而我用无内毒素大提试剂盒时,就没出现这种情况,溶度有1000多微克每毫升。
所以,建议:
1.要转染最好就用无内毒素大提试剂盒
2.已小提,想纯化滤菌用于转染建议参考
“将质粒溶液进行浓缩,每50微升质粒溶液加2微升5mol/L NaC1混匀,冷的无水乙醇沉淀质粒,10 000r/min离心5min,弃去上清,用70% 的乙醇洗1次,无菌条件下真空干燥,以灭菌生理盐水溶解质粒至质
量浓度为1 微g/微L,一20度保存。质粒转染前,行酶切及测序鉴定。”