蛋白质呈色反应—双缩脲反应实验
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【实验原理】
当尿素经加热至180℃左右时，两分子尿素脱去一分子氨，
进而缩合成一分子双缩脲。
其在碱性条件下双缩脲与铜离子结合成红紫色络合物，此反应称为双缩脲反应。
多肽及蛋白质分子结构中均含有许多肽键，其结构与双缩脲分子中的亚酰胺键相同。因此，在碱性条件下与铜离子也能呈现出类似于双缩脲的呈色反应。其反应过程如下：
【 试剂 】
1. 蛋白质溶液（鸡蛋清用蒸馏水稀释10倍，通过2-3层沙布滤去不容物）
2.0.1%甘氨酸溶液
3. 0.01%精氨酸溶液
4. 10%NaOH溶液
5. 1%CuSO4 溶液
6.尿素结晶
【实验操作】
1. 双缩脲的制备
取少许尿素结晶 (约火柴头大小)放入干燥的试管中，微火加热至尿素熔解至硬化，刚硬化时立即停止加热，此时双缩脲即已形成。冷却后加10%氢氧化钠溶液约1ml、并震荡，再加入1%硫酸铜溶液2滴，再震荡，观察颜色的变化。
注意：
a.在操作过程中试管不能冲向其他人以防止烫伤；
b.控制加热的时间既不能过长也不能过短；
c.加热时火不能太大，防止碳化。
2. 观察现象
另外取试管4支，按照下表加入各种 试剂 ，观察并解释现象。
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试剂 |
管号 |
|||
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1 |
2 |
3 |
4 |
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蛋白质样液（ml） |
1.0 |
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0.01%精氨酸（ml） |
1.0 |
|||
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0.1%甘氨酸（ml） |
1.0 |
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10%NaOH（ml） |
2.0 |
2.0 |
2.0 |
2.0 |
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蒸馏 水（ml） |
1.0 |
|||
|
现象 |
