原代微血管内皮细胞的体外分离培养
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1、微血管内皮细胞培养简述
2、微血管内皮细胞的分离
酶消化法:优点是分离的细胞多、纯度较高;缺点是酶对某些蛋白有破坏作用。消化后的组织悬液需要用血清终止酶活性,并将组织悬液通过200目的金属筛去除未消化组织。
机械分离法和磁珠分离法:可以避免酶对内皮细胞的损伤,缺点是其他细胞的污染可能性较大。
磁珠分离法:利用特异的介质(表面有内皮细胞特异单克隆抗体的磁珠)从其他细胞群中分离出内皮细胞。这种方法虽然可以分离出可用于炎症研究的微血管内皮细胞,但是分离的细胞量少。
3、微血管内皮细胞的纯化
(1)纯化的方法:主要有利用尼龙网或不锈钢网筛过滤细胞悬液、物理刮除法、生长特性选择法、局部消化法、差速黏附法和免疫磁珠法等。
(2)生长特性选择法:根据内皮细胞的生长特性加以分离,即已贴壁的组织块,培养一段时间后除血细胞外,其他细胞尚未离开组织块而微血管内皮细胞最先游出,这时立即移去组织块,所留的大部分是血细胞和内皮细胞,血细胞经传代1代至2代后自动消除,剩下便是微血管内皮细胞。这种方法由于避免了对细胞的机械和化学损伤,且不需特殊设备,操作简单,较为可取。
4、微血管内皮细胞的鉴定
微血管内皮细胞的鉴定:
(1)根据器官和组织的起源,从形态、表型、生化和功能等方面进行综合评价。
(2)微血管内皮细胞一般呈单层生长,有接触抑制现象,呈典型的铺路石状,电镜下可以看到Weibel-Palade小体。
(3)表面表达CD31、CD34、凝血调节蛋白、第Ⅷ因子和选择素等,细胞可摄取低密度脂蛋白,产生前列腺素,内吞功能,结合植物血凝素,形成毛细血管样网络。
5、微血管内皮细胞的培养要点
6、PriCells的产品
(1) 原代微血管内皮细胞, 5×105 细胞数/1ml
(2) 原代细胞分离试剂盒
(3) 原代细胞分离鉴定盒
(4) 原代内皮细胞特制基础培养基