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血清Western Blot去除白蛋白(Albumin)和IgG

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应用Western Blotting的方法检测血清中某种蛋白的含量是,最关键的问题是要将血清做怎样的电泳前处理.


一般的处理方式:


1. 常规分离血清,即取血后常温放置,使其凝固,然后 3000 rpm 15 min 离心 , 取上清即可。


2. 测血清蛋白浓度。


3. 用 Laemmli buffer (蛋白裂解液)稀释至所需浓度,我一般为 5ug/ul.


4. 加入适量 loading buffer , 100 ℃ 煮 5 分钟。注意:有时会出现水煮后,蛋白液变得非常粘稠,这时可以在 6 5 ℃ 煮 10-20 minutes 以替代沸水煮。

n 对于目标蛋白在血清中含量很低,或者目标蛋白分子量与白蛋白或球蛋白分子量相近的情况下,必烦要去除血清中的白蛋白和 / 或球蛋白,以下是一些知名厂商提供的试剂盒,使用较为简便,但价格有点贵哦。


Bio-Rad


去除白蛋白


Aurum Affi–Gel 蓝胶小型试剂盒和层析柱


通过亲和层析,Affi–Gel 蓝胶能去除血清和血浆中90%的白蛋白。


去除白蛋白/IgG


Aurum 血清蛋白Mini试剂盒


Aurum 血清蛋白Mini试剂盒包含了Micro Bio-Spin层析柱,其中填充了Affi-Gel 蓝胶和Affi-Gel Protein A填料。这两种树脂混合物能同时选择性地结合白蛋白和IgG,处理过的样品无需额外纯化,就能立即用于2D的分析。一次纯化就能搞定两个东西,操作步骤减少了,效率也提高了。
Qiagen 的Qproteome Albumin/IgG Depletion Kit(¥2690/6tests)

美 国 G-Biosciences™/Genotech™


AlbuminOUTTM


血浆和脑脊液等样品中含有大量的白蛋白,在2D 电泳和其他研究中易掩盖其他低丰度蛋白。本试剂盒用于有效去除这些样品中的白蛋白。


试剂盒利用CibachronTM 蓝色染料结合白蛋白,并优化了人白蛋白的去除方法。采用的是离心的柱方法,每个柱包含了0.2ml 染料结合树脂,可以结合> 2mg 的人白蛋白。试剂盒可有效去除5-50μl 人血浆中>98%的白蛋白,且只需10min。


高容量的染料结合树脂(10-20 mg 蛋白/ml 树脂)可瞬间结合并去除样品中的白蛋白,样品来源包括人、猪、绵羊、狗、兔、大鼠和牛。


试剂盒也可用于其他物种,有25 或50 次样品处理两种包装。


特点:


Ø 10min 之内去除样品中的白蛋白
Ø 用CibachronTM蓝色染料结合白蛋白
Ø 每柱容量> 2 mg 人白蛋白
Ø 去除5-50μl 人血浆中>98%的白蛋白

(责任编辑:大汉昆仑王)

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