组织染色体免疫共沉淀（ChIP）方法心得

最近要做chip实验，不过是组织的。周围做chip的人不多，有几个做的也是做细胞的。于是到丁香园来搜索，结果只有提问的没有回答的。经过最近的摸索，终于找到了步骤。但进一步的实验还未摸索。在这儿把组织裂解成细胞的方法和步骤分享一下。本人英语水平有限，不保证完全准确。最后会给出原文的Protocol，供大家参考。因为做细胞chip的Protocol还是比较多的。组织裂解成细胞之后就可以按照细胞chip的Protocol做了。

组织裂解步骤：

方法一：

1. 称新鲜冰冻组织。切成1-3 mm3小块。

2. 转移组织到50ML试管里。加入10 ml of 1X PBS.

3. 加甲醛至终浓度为1%。室温下转动15-20mins。

4. 加2.5 M Glycine至终浓度为0.125 M(终止交联)。4°C下转动10mins。

5. 100 g, 4°C 离心样本5mins。

6. 弃上清，取沉淀。用45 ml 冰冻 1X PBS和25 ml 冰冻1X PBS各洗一次。离心弃上清。

7. 再加入2 ml 冰冻1X PBS。匀浆机裂解组织。

8. 1000 rpm，4°C ，离心5 min。弃上清。加入1x PBS（300mg/ml），分装成1ml每管（可做10次ChiP）。离心去上清。

9. 1 ml冰冻Buffer I重悬细胞。离心取沉淀。

10. 1 ml冰冻Buffer II重悬细胞。离心取沉淀。

11. 0.5 ml裂解缓冲液重悬细胞。（此时样本可以进行超声裂解）

方法二：

1. 称新鲜冰冻组织。切成1-3 mm3小块。

2. 转移组织到50ML试管里。加入10 ml of 1X PBS.

3. 加甲醛至终浓度为1%。室温下转动15-20mins。

4. 加2.5 M Glycine至终浓度为0.125 M(终止交联)。4°C下转动10mins。

5. 100 g, 4°C 离心样本5mins。

6. 弃上清，取沉淀。用45 ml 冰冻 1X PBS和25 ml 冰冻1X PBS各洗一次。离 心弃上清。

7. 再加入2 ml 冰冻1X PBS。匀浆机裂解组织。1000 rpm，4°C ，离心5 min。弃上清。

8. 细胞裂解液重悬细胞。加入蛋白酶抑制剂PMSF (10 ul per ml), aprotinin (1 ul per ml) and leupeptin (1 ul per ml). 冰上孵育10-15mins

9. 5,000 rpm ，4°C离心5分钟。取沉淀

10. 细胞核裂解液重悬细胞加入（8）中的蛋白酶抑制剂。冰上孵育10-20mins。

11. 接下来就进去超声过程了。