PC12细胞的其他问题

PC12传代的消化

丁香园wangpengljr的问题：

我最近养PC12细胞做分化方面的研究，但是遇到的难题是PC12细胞本身的贴壁能力就差（养PC12细胞最好是用Gibco的马血清，Hyclone的不贴壁！），最开始没有用胰酶处理，直接吹打下细胞发现成团现象，用0.02％EDTA的PBS吹打似乎不易成团，但是慢慢地细胞贴壁能力下降了，我用poly－Lys包被都不行。我之所以不用胰酶是因为怕胰酶的处理会影响我以后的NGF诱导分化的实验，难道非得要我用胰酶吗？？那么该用多大浓度合适呢？

丁香园yaya0011的回答：

这个细胞我正在养，一开始养的也不好，不容易贴壁，现在可健康了^_^ 因为细胞是从其他lab拿来的，所以我用的条件不是atcc上说得那个，我用6％fbs和6％马血清加dmem养，全部都是Gibco的。

培养条件试了很多，最后发现7。5％co2 是最好的。你可以试试。当然5％也可以，但是长得慢，所以我最后选了7。5，一般3天subculture。

加马血清似乎是因为里面有某种fbs中没有的营养物质，总之一定要加！

用trypsin后PC12会不健康，所以有二个办法。1。每次用完trypsin后1000rpm离心3min。将trypsin吸走。2。每次subcuture时候不用trypsin,和PBS，直接用medium把贴壁的细胞吹下来吹成单个的再长。我用的是后面一种，效果非常好。细胞很健康！

PC12健康与否的判断方法（是我自己总结的）：

没有加NGF时，如果细胞很健康，会长出很短的小轴突，整体圆圆的，很可爱。 当它不健康时，你会发现，1，细胞不易贴壁了，会漂很多。2。细胞会呈现椭圆形，轴突变长（这时的细胞其实状态已经不好了，即使贴壁也不行！）