抗体效价测定方法之试管凝集实验

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【原理】

大分子颗粒性抗原 (如细菌、红细胞等)与其相应的抗体相结合，在适量的电解质存在及一定的温度下，经过一定的时间可出现肉眼可见的凝集团块，是为凝集反应。

试管凝集实验的应用，一般均以标准抗原 (已知抗原)测定免疫血清或患者血清中抗体的效价。

【材料】

1:10抗羊红细胞免疫 血清(配制前需经56℃30分钟灭活)

1%绵羊红细胞生理盐水悬液

生理盐水

试管及1ml刻度吸管

试管架及吸液橡皮乳头、红蜡笔

恒温箱

【方法】

1.取试管8支，排列于试管架上并做好标记。

2.每管各加入生理盐水0.5ml。

3.吸取1:10抗绵羊红细胞免疫 血清0.5ml加入第1管中并充分混匀。

4.自第1管中吸出0.5ml加入第2管中，经充分混匀后吸出0.5ml加入第3管中，如此依次稀释至第7管，混匀后吸出0.5ml弃去。此时1~7管所含免疫 血清的稀释度为1:20、1:40、1:80、1:160、1:320、1:640，1:1280第7管不加免疫血清做为对照。

5.1~8管每管各加1%绵羊红细胞悬液各0.5ml。(注意：加入前必须将红细胞悬液充分混匀)。

6.此时第1~7管的血清最终稀释度为1:40、1:80、1:160、1:320、1:640、1:1280、1:2560。

7.摇匀后，静置于37℃下，1小时后观察结果并写出实验记录。

【结果】

1.观察前切勿摇动试管，以免凝集分散。

2.首先应观察对照管，该管因无相对应的免疫血清故不应有凝集现象，血球应全部沉于试管底部呈规则园盘状。如出现凝集现象则说明实验操作有误或血球本身有自凝现象，试验结果不能成立。

3.再观察1~6试验管，并以++++、+++、++、+，分别表示凝集强度，不凝集者记以“―”。

++++：完全凝集，呈厚膜状铺于管底，边缘呈锯齿状。

+++：血球呈薄层贴于管底，边缘不齐。

++：中央呈较小园盘状沉淀，边缘凝集呈颗粒状。

+：血球呈较大的园盘状沉淀，边缘有少量凝集颗粒。

―：无凝集，血球沉于管底园盘状。

4.以血清最高稀释度仍能出现“++”凝集现象者，作为该免疫血清的效价(滴度)。例如，在本次实验中第5管(1:640)呈“++”凝集，第6管(1:1280)呈“+”凝集或“―”，对照管为“―”，则该血清的效价为1:640。

注：

1.免疫血清在实验前须经56℃30分钟灭活，是指对免疫血清中所含补体活性的灭活，如不灭活处理则直接影响凝集结果，例如在本次实验中高浓度的免疫血清可使血球出现溶解现象。

2.本次实验对凝集反应判读结果的方法，仅属对红细胞凝集的判读，而对其它颗粒性抗原(如细菌菌体抗原)在凝集反应中判读结果的方法则在微生物学实习指导中另有说明。