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抗体1、2ul,应该用什么方法纯化

相关实验:酶与抗体的偶联实验

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肖香燕

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3 个回答

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Eason老歌迷

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可以试一试Protein A和protein G纯化法。基本原理就是protein A和proteiin G 可以和抗体IgG分子的Fc段特异性结合。Protein A和protein G 作为配基可以被偶联到琼脂糖凝胶上,当抗血清从中流过时,特异性的IgG就与配基结合,其他杂蛋白则穿流而过。因两种蛋白纯化抗体时对不同宿主的抗体的结合能力不同,我们需要具体情况具体对待,分别选择protein A 或者protein G,或者是protein A/protein G组合。一般推荐小鼠单抗IgG2a,IgG2b,IgG3,兔,人,猪的多克隆抗体用protein A纯化,而小鼠单抗IgG1, 大鼠单抗,小鼠,大鼠,山羊的多克隆抗体则选择用protein G纯化。

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疏影

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量较小,可以考虑免疫亲和纯化法将抗原作为一种配基偶联在sepharose 4B上,血清等生物液体中的特异性抗体与sepharose 4B上的抗原进行特异性结合,其他杂蛋白和杂抗体则不被结合,通过洗涤和洗脱等一系列实验步骤即可得到高纯度的目标抗体。

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毛利小五郎的徒弟

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可以尝试用盐析法(饱和硫酸铵沉淀法)操作如下:
该纯化方法是基于在待纯化免疫血清中加入饱和硫酸铵溶液,由于抗体也是一种蛋白质,其在水溶液中的溶解度是由其本身携带的亲水基团数和电荷数决定的,当我们向抗血清中加入饱和硫酸铵溶液后,硫酸根离子和铵根离子与抗体竞争溶液中的水分子,因为硫酸根离子和铵根离子与抗体分子相比,具有更强的亲水性,因此抗体分子表面的水化膜被破坏,同时其暴露出来的带电基团被溶液中的盐离子所中和进而导致其溶解度大大降低,依据此原理从而将其纯化
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