试管凝集实验(Tube agglutination test)—抗体效价测定
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【原理】
大分子颗粒性抗原(如细菌、红细胞等)与其相应的抗体相结合,在适量的电解质存在及一定的温度下,经过一定的时间可出现肉眼可见的凝集团块,是为凝集反应。
试管凝集实验的应用,一般均以标准抗原(已知抗原)测定免疫血清或患者血清中抗体的效价。
【材料】
1:10抗羊红细胞免疫血清(配制前需经56℃30分钟灭活)
1%绵羊红细胞生理盐水悬液
生理盐水
试管及1ml刻度吸管
试管架及吸液橡皮乳头、红蜡笔
恒温箱
【方法】
1.取试管8支,排列于试管架上并做好标记。
2.每管各加入生理盐水0.5ml。
3.吸取1:10抗绵羊红细胞免疫血清0.5ml加入第1管中并充分混匀。
4.自第1管中吸出0.5ml加入第2管中,经充分混匀后吸出0.5ml加入第3管中,如此依次稀释至第7管,混匀后吸出0.5ml弃去。此时1~7管所含免疫血清的稀释度为1:20、1:40、1:80、1:160、1:320、1:640,1:1280第7管不加免疫血清做为对照。
5.1~8管每管各加1%绵羊红细胞悬液各0.5ml。(注意:加入前必须将红细胞悬液充分混匀)。
6.此时第1~7管的血清最终稀释度为1:40、1:80、1:160、1:320、1:640、1:1280、1:2560。
7.摇匀后,静置于37℃下,1小时后观察结果并写出实验记录。
【结果】
1.观察前切勿摇动试管,以免凝集分散。
2.首先应观察对照管,该管因无相对应的免疫血清故不应有凝集现象,血球应全部沉于试管底部呈规则园盘状。如出现凝集现象则说明实验操作有误或血球本身有自凝现象,试验结果不能成立。
3.再观察1~6试验管,并以++++、+++、++、+,分别表示凝集强度,不凝集者记以“―”。
++++:完全凝集,呈厚膜状铺于管底,边缘呈锯齿状。
+++:血球呈薄层贴于管底,边缘不齐。
++:中央呈较小园盘状沉淀,边缘凝集呈颗粒状。
+:血球呈较大的园盘状沉淀,边缘有少量凝集颗粒。
―:无凝集,血球沉于管底园盘状。
4.以血清最高稀释度仍能出现“++”凝集现象者,作为该免疫血清的效价(滴度)。例如,在本次实验中第5管(1:640)呈“++”凝集,第6管(1:1280)呈“+”凝集或“―”,对照管为“―”,则该血清的效价为1:640。
注:
1.免疫血清在实验前须经56℃30分钟灭活,是指对免疫血清中所含补体活性的灭活,如不灭活处理则直接影响凝集结果,例如在本次实验中高浓度的免疫血清可使血球出现溶解现象。
2.本次实验对凝集反应判读结果的方法,仅属对红细胞凝集的判读,而对其它颗粒性抗原(如细菌菌体抗原)在凝集反应中判读结果的方法则在微 生物 学实习指导中另有说明。
大分子颗粒性抗原(如细菌、红细胞等)与其相应的抗体相结合,在适量的电解质存在及一定的温度下,经过一定的时间可出现肉眼可见的凝集团块,是为凝集反应。
试管凝集实验的应用,一般均以标准抗原(已知抗原)测定免疫血清或患者血清中抗体的效价。
【材料】
1:10抗羊红细胞免疫血清(配制前需经56℃30分钟灭活)
1%绵羊红细胞生理盐水悬液
生理盐水
试管及1ml刻度吸管
试管架及吸液橡皮乳头、红蜡笔
恒温箱
【方法】
1.取试管8支,排列于试管架上并做好标记。
2.每管各加入生理盐水0.5ml。
3.吸取1:10抗绵羊红细胞免疫血清0.5ml加入第1管中并充分混匀。
4.自第1管中吸出0.5ml加入第2管中,经充分混匀后吸出0.5ml加入第3管中,如此依次稀释至第7管,混匀后吸出0.5ml弃去。此时1~7管所含免疫血清的稀释度为1:20、1:40、1:80、1:160、1:320、1:640,1:1280第7管不加免疫血清做为对照。
5.1~8管每管各加1%绵羊红细胞悬液各0.5ml。(注意:加入前必须将红细胞悬液充分混匀)。
6.此时第1~7管的血清最终稀释度为1:40、1:80、1:160、1:320、1:640、1:1280、1:2560。
7.摇匀后,静置于37℃下,1小时后观察结果并写出实验记录。
【结果】
1.观察前切勿摇动试管,以免凝集分散。
2.首先应观察对照管,该管因无相对应的免疫血清故不应有凝集现象,血球应全部沉于试管底部呈规则园盘状。如出现凝集现象则说明实验操作有误或血球本身有自凝现象,试验结果不能成立。
3.再观察1~6试验管,并以++++、+++、++、+,分别表示凝集强度,不凝集者记以“―”。
++++:完全凝集,呈厚膜状铺于管底,边缘呈锯齿状。
+++:血球呈薄层贴于管底,边缘不齐。
++:中央呈较小园盘状沉淀,边缘凝集呈颗粒状。
+:血球呈较大的园盘状沉淀,边缘有少量凝集颗粒。
―:无凝集,血球沉于管底园盘状。
4.以血清最高稀释度仍能出现“++”凝集现象者,作为该免疫血清的效价(滴度)。例如,在本次实验中第5管(1:640)呈“++”凝集,第6管(1:1280)呈“+”凝集或“―”,对照管为“―”,则该血清的效价为1:640。
注:
1.免疫血清在实验前须经56℃30分钟灭活,是指对免疫血清中所含补体活性的灭活,如不灭活处理则直接影响凝集结果,例如在本次实验中高浓度的免疫血清可使血球出现溶解现象。
2.本次实验对凝集反应判读结果的方法,仅属对红细胞凝集的判读,而对其它颗粒性抗原(如细菌菌体抗原)在凝集反应中判读结果的方法则在微 生物 学实习指导中另有说明。