氨基酸组分分析

问：我有一蛋白想做氨基酸组分分析，想用6MHCl处理成单氨基酸后用高效液像色谱议做，请问具体如何做，谢谢？

答：这个问题比较大，呵呵，以前做过一点，和楼主讨论一下吧。

首先，氨基酸组成分析工作量不小，而且要求操作者有较高的操作水平，如果你只是为了检测一下的话，不如花点钱寄出去测测，自己做有时徒劳无功啊。液相色谱是可以做，但是检测机构都有专门的氨基酸分析仪（虽然核心也是一个HPLC）。

如果楼主坚持自己做，那么我说说以前我所了解的一些东西，也就是一个大概，因为也过去两年多了。希望能帮到你。氨基酸组成分析的实验过程（色谱法）主要分为：水解、衍生和色谱三步。

先说说水解，主要就是酸法和酶法，酸法会对某些氨基酸有破坏作用，而酶法虽然温和，但有时水解不完全。还是采用酸法的多一些。酸法时可以加入2%的苯酚作为保护剂，防止Met和Cys被氧化；对于Ser可以加入秋季乙醇保护，具体浓度记不清了。

对了，Cys最好要保护起来，否则定量不准，保护的方法可以烷基化，具体的过程可以查查文献。整个过程最好能抽真空并充氮。

衍生化的方法有很多，用得多的有OPA（用荧光检测器）和PTC（用254nm紫外检测）两种，都是柱前衍生，就是在上HPLC前进行衍生化。这个楼主可以查查文献，俺记不太清具体的操作了。基本上那些检测机构也就是这两种衍生用得多。

色谱就简单了，一般就是A相醋酸钠，B相甲醇或乙腈。两种方法出峰顺序不同，查到一篇使用某种方法的相关的文献就可以知道顺序了。然后积分分析就行。不过氨基酸组成分析的误差还是不小的，5~10%，甚至更大。