种子蛋白质系统分析:种子蛋白质氨基酸组分分析（氨基酸自动分析仪法）

一、目的
氨基酸是蛋白质的基本结构单位。构成蛋白质的氨基酸共20 种，其中Lys、Phe、Trp 、val、Leu、Ile、The、Met 等8 种是人体的必需氨基酸，必需由蛋白类食物供给。不同食品的蛋白质含量不同，氨基酸组成也有差异，其必需氨基酸的含量是否平衡，对营养品质有很大影响。氨基酸组成分析又是蛋白质顺序分析的重要组成部分，因此，氨基酸组分分析是常用的重要分析项目。通过本实验了解氨基酸分析仪的结构及工作原理，学习待测样品的处理方法。

二、原理
种子蛋白质在110℃条件下，经5.7mol / L 恒沸点盐酸作用22-24h，被水解生成组成该蛋白质的各种游离氨基酸（色氨酸破坏，天冬酰胺和谷氨酰胺分别转变成天冬氨酸和谷氨酸），经上机前处理即可用氨基酸分析仪测定出各种氨基酸的含量。

三、 仪器 、试剂和材料
1． 仪器
1）水解试管
2）喷灯
3）台式高速离心机
4 ) 121MB 或其他型号氨基酸自动分析仪
2． 试剂
( 1 ) 5.7mol / L 恒沸点盐酸
( 2 ) pH2.2 柠檬酸缓冲液：柠檬酸21g，氢氧化钠8.4g，浓盐酸16 ml，水溶后定容至1000ml 。

四、操作步骤
1．准确称取谷物全粉或脱脂粉30mg ，小心送入水解试管底部，加8ml 5.7 mol / L盐酸。在超声波水槽中振荡除气后于喷灯上封闭管口，置110 士1℃ 烘箱中水解22h。
2．冷却后切开试管，将水解液过滤到25ml 容量瓶内，并用无离子水冲洗试管和滤纸，然后定容至刻度。
3．取5ml 滤液置于蒸发皿中，在水浴上蒸干。残留物用无离子水3-5 ml 溶解并蒸干，反复3 次。
4．准确加入pH2.2 柠檬酸缓冲液5ml，溶解提取物。取1.5ml 样品，在高速 离心机 上离心（10000r / min , 20min）。
5．用121MB 型 氨基酸 分析仪专用注射器吸取上清液50μl 于样品贮存螺旋管中，上机分析。

五、结果处理
氨基酸 分析仪采用外标法，根据标准氨基酸校正液的浓度和保留时间确定样品液中各种相应氨基酸的浓度。主机随带的数据处理机和打印机，自动打印出各种氨基酸的浓度，样品中各种氨基酸的含量可由下式计算：

其中，Al： 样品中氨基酸峰面积；
A ₀ ： 标准氨基酸峰面积；
C ₀ ： 标准氨基酸浓度（umol / ml ) ;
D： 样品稀释倍数；
M： 氨基酸分子质量；
W： 样品量（g）