用分离的亚细胞组分分析蛋白质的磷酸化

样品
胞内缓冲液 透化缓冲液
离心管

1. 分离细胞器。

2. 于 4℃ 用胞内缓冲液清洗细胞器样品 3 次，将相当于 1 mg 蛋白质的样品转至带螺帽的小离心管，放入冰盒。

3. 离心，吸去上清，加 200 μl 预热至 37℃ 的透化缓冲液，轻轻混匀，放入 37℃ 水浴箱 。

4. 加链球菌溶血素 O 储存液至终浓度 60 单位/ml，加冷 ATP 储存液至 100 μmol/L。

5. 加 [γ-³²P] ATP 至终浓度 50~500 μCi/ml。

6. 加入要试验的试剂，如激酶/磷酸酶抑制剂、蛋白质激酶或者磷酸酶。

7. 制备免疫沉淀分析样品或者 PAGE 样品。