材料与仪器
细胞培养物
HEPES
培养基
HEPES
培养基
步骤
1. 约在实验开始前 1 小时，将细胞培养物换上含有预热（37℃）的 20 mmol/L HEPES（pH 7.2）的培养基，继续培养。让细胞在实验前与新培养基达成平衡。
2. 将所需数量的有细胞的培养基放在一个丝网托盘上，放入 37℃ 温箱再平衡 10 分钟。细胞在这种状态下能保持稳定 1 小时左右，这取决于培养基的蒸发速度。
3. 吸去培养基，立刻用预热的胞外缓冲液冲洗。
4. 去胞外缓冲液，换上透化缓冲液，加 60 单位/ml 的链球菌溶血素 O 储存液至终浓度 0.6 单位/ml。同时加 10 mmol/L 的冷 ATP 储存液至终浓度 100 μmol/L。
5. 37℃ 孵育处理过的细胞 1~5 分钟。
6. 加 [γ-32P] ATP 储存液至终浓度 50~500 μCi/mI。
7. 加入要研究的实验试剂，如药理试剂、多肽、Fab' 片段，放置一段时间让它们发挥作用。
8. 加入所需的受体激动剂。
9. 制备用于免疫沉淀分析的样品或者聚丙烯酰胺凝胶电泳样品。
2. 将所需数量的有细胞的培养基放在一个丝网托盘上，放入 37℃ 温箱再平衡 10 分钟。细胞在这种状态下能保持稳定 1 小时左右，这取决于培养基的蒸发速度。
3. 吸去培养基，立刻用预热的胞外缓冲液冲洗。
4. 去胞外缓冲液，换上透化缓冲液，加 60 单位/ml 的链球菌溶血素 O 储存液至终浓度 0.6 单位/ml。同时加 10 mmol/L 的冷 ATP 储存液至终浓度 100 μmol/L。
5. 37℃ 孵育处理过的细胞 1~5 分钟。
6. 加 [γ-32P] ATP 储存液至终浓度 50~500 μCi/mI。
7. 加入要研究的实验试剂，如药理试剂、多肽、Fab' 片段，放置一段时间让它们发挥作用。
8. 加入所需的受体激动剂。
9. 制备用于免疫沉淀分析的样品或者聚丙烯酰胺凝胶电泳样品。
来源：丁香实验
