新一代细菌内毒素检测技术----定量法鲎试验

互联网2012-11-01

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细菌内毒素（既热原）是革兰氏阴性菌细胞壁的主要成分，少量的内毒素静脉注射就可以引起发烧即“热原反应”，大剂量注射则可引起血液循环障碍和内毒素休克，严重时甚至导致死亡。因此，生物制品类、注射用药剂、化学药品类、放射性药物、抗生素类、疫苗类、透析液等制剂以及植入性医疗器材必须经过细菌内毒素检测试验合格后才能使用。

鲎试验法是国际上至今为止检测内毒素最好的方法，它简单﹑快速﹑灵敏﹑准确，因而被欧美药典及我国药典定为法定内毒素检查法。该法具有灵敏度高、特异性强和操作简便快捷等特点，逐步取代家兔热原试验，成为注射用药、静脉用药、医疗器械、食品、水源细菌内毒素检测的最佳方法。

鲎试验法所用的试剂为从海洋动物鲎的变形细胞溶解物提取的鲎试剂。目前国内市场上的鲎试剂大多为凝胶法鲎试剂。凝胶法鲎试剂是根据鲎血变形细胞裂解物和细菌内毒素反应，形成凝胶来目测判断是否有细菌内毒素存在，此方法无法准确定量。只能得出大于或等于内毒素限值或者小于内毒素限值的定性结果。

近年来鲎试验法的应用范围不断开拓，多种原因导致了凝胶法鲎试剂已经不能满足鲎试验法发展的需求：

一、制药工业生产工艺流程的细菌内毒素水平动态监控必须要采用定量法鲎试剂。目前凝胶法鲎试剂大多用于制药工业成品出厂前的内毒素限量试验。如果发现内毒素含量等于或者大于内毒素限值，该批产品不合格，必须销毁。

不合格品的出现将会对制药企业产生重大经济损失。而采用定量法鲎试剂对生产工艺流程进行内毒素水平的动态监控，在内毒素水平升高，但还未达到或超过内毒素限值时及时发现问题，可以避免企业的经济损失。

制药行业实行新版GMP的要求：

（1）药品生产过程的质量控制为质量控制中的事前控制。

（2）对生产过程进行动态控制。

（3）要求取样方便、微量、操作简单、快速、检查准确可靠并能自动处理数据。

定量法鲎试剂灵敏度高，操作自动化，可以准确定量，最适于监控内毒素含量的变化趋势，可以有效控制各环节操作，及时反馈信息给相关操作部门，能更直观和更好地控制内毒素，可以大大减少不必要的损失。

二、在临床医学上，病人体液中的细菌内毒素水平定量检测具有重大意义。病人体液的细菌内毒素含量直接体现了革兰氏阴性菌感染的程度。体液内毒素水平检测可以用于快速诊断革兰氏阴性菌感染引起的脓毒症及内毒素血症。由革兰氏阴性菌所引起的内毒素血症及脓毒血症目前仍是临床上的主要死亡原因之一。

作为临床早期诊断革兰氏阴性菌感染的细菌学培养需要几天时间，不仅耗时长，而且培养阳性率很低。厦门市鲎试剂实验厂有限公司内毒素检测鲎试剂盒（动态浊度法）采用独特配方样本处理液，有效排除了血浆中各种干扰因素对鲎试验的干扰，在2小时之内准确检测血浆细菌内毒素含量，是革兰氏阴性菌感染早期诊断的最佳方法之一。

三、根据鲎试剂中的G因子旁路反应而设计的真菌（1,3）-β-D-葡聚糖定量检测鲎试验是早期快速诊断深部真菌感染的好方法。近年来随着广谱抗生素、激素和免疫抑制剂以及各种导管插管等治疗手段的广泛应用，深部真菌感染的发病率日渐增高。免疫功能低下患者，如 HIV感染者，糖尿病患者，外科大手术术后患者等，也易发生深部真菌感染。目前，深部真菌感染已成为免疫功能低下患者发病和死亡最常见的原因。

诊断真菌病需要进行真菌培养，耗时长,培养阳性率很低。厦门市鲎试剂实验厂有限公司生产出真菌葡聚糖检测试剂盒（动态浊度法）可以在2小时内定量检测人血浆中的（1,3）-β-D-葡聚糖。为早期快速诊断深部真菌感染诊断提供准确依据。

定量法鲎试验在药典上称为光度测定法。分为浊度法和显色基质法。浊度法鲎试剂是利用光学检测系统读取在形成凝胶的过程中反应液浑浊度升高的快慢和内毒素浓度成反比例的关系由软件转换成内毒素的浓度。而显色基质法是在反应液中添加人工合成的显色基质，根据反应液中内毒素浓度和在孵育终止时释放出的显色基团的量之间成正比，定量检测样品中的内毒素浓度。

无论是动态浊度法和显色法鲎试验均需要带良好温育系统的动态光度测定仪器及配套专业的内毒素和真菌葡聚糖检测软件。

厦门市鲎试剂实验厂有限公司的美国原装进口鲎试验微生物检测系统是专门为细菌内毒素及真菌葡聚糖定量检测鲎试验设计的微生物检测系统。配套厦门市鲎试剂实验厂有限公司TALgent专业软件和其他辅助仪器及除热原耗材，适用于所有的定量法鲎实验，是内毒素检测首选推荐机型。

具有如下特点：

1、独特的4-Zone™温度控制，控温精确，减少蒸发及边缘效应，为温度敏感的内毒素实验提供良好的重复性和精确性

2、卓越多通道光路设计，检测速度快，配合厦门鲎试剂的显色基质试剂盒，16min即可完成反应。

3、操作简单，检测灵敏度高，可检测内毒素灵敏度限值0.001EU/ml，配合专业分析软件TALgent，一步即成，可检测多达96个样品。

厦门市鲎试剂实验厂有限公司成立30年来，一直走在定量法鲎试剂发展的前列。厦门市鲎试剂实验厂有限公司生产的浊度法试剂特异性强，线性范围宽为0.001EU/ml-100EU/ml，操作简便，一步即成。

公司特色产品中的显色基质法鲎试剂盒操作简便，是目前反应时间最短的定量法鲎试剂。该试剂盒不依赖凝固蛋白形成凝胶，抗干扰能力强，特别适用于生物制品（蛋白、疫苗等）的细菌内毒素检测。

公司为临床市场研发了内毒素检测鲎试剂（动态浊度法）和真菌葡聚糖检测试剂盒（动态浊度法）成功注册和上市。

其中内毒素检测鲎试剂（动态浊度法）具有以下特点：

1.对细菌内毒素特异反应，各种革兰氏阴性菌内毒素均可检出；

2.配有样本处理液，可消除血浆中的干扰因子对鲎试验的干扰；

3.适用于革兰氏阴性菌感染的早期诊断，在无明显症状之前就可诊断出；

4.快速高效：2小时内出结果；

5.灵敏度高达0.005EU/ml，准确定量；

6.抗干扰性强：不受抗生素治疗的影响，不会和其他的多糖起假阳性反应；

7.可同时检测96个样品，可以批量操作，耗材成本低。

该试剂盒为临床上革兰氏阴性菌的感染提供早期诊断及治疗，为原因不明发热提供快速辅助诊断，为免疫抑制、肝脏功能障碍提供辅助诊断，给肠源性内毒素血症的提供早期诊断和预后参考以及给（革兰氏阴性菌所致）脓毒症、多脏器功能衰竭等重症疾患的提供早期诊断。

真菌葡聚糖检测试剂盒（动态浊度法）通过定期检测血浆中葡聚糖浓度变化，评价选用药物的有效性，监护侵袭性真菌感染易感人群的病发状态。

试剂盒具有如下特点：

1.早期诊断，在无明显症状之前就可诊断出；

2.可检测大多数致病真菌如念珠菌、曲霉等的感染；

3.快速高效：2小时内出结果，可同时检测96个样品；

4.灵敏度高达5pg/ml，准确定量；

5.特异性好、抗干扰性强：不受抗真菌治疗的影响，不会和其他的多糖起假阳性反应；

6.适用于96孔微板，可以批量操作，耗材成本低。为目前临床上诊断深部真菌感染最好的方法之一。