用于层析的填料（DEAE-纤维素52）如何再生，再利

问： 请问各位，用于层析的填料（DEAE-纤维素52）如何再生，再利用，怎么处理保存再利用呢？？我现在实验正进行到这步，不知道怎么处理，好急，请高手给些意见！谢谢！

另外，在我层析前用酸碱处理DEAE-纤维素52时，水洗很久都不到合适的PH值，就酸碱处理就花了一天时间，请那位高手能告诉我详细的处理过程，让我检查下自己是否哪里有问题。非常感谢！！

答: DEAE52预处理方案：

取０.５M NaOH 500 ml (加入 NaCl 使浓度为０.５M NaCl), 称DEAE-纤维素DE-52 30g, 洒入上述液体中，混匀．室温放置２h, 换０.５M NaOH　一次．
然后抽滤洗涤，, ０.５M NaOH → H2O至 pH 6.0 →０.５M HCl → H2O至 pH 6.0→０.５M NaOH→H2O至 pH 6.0。
注：这是我做实验时的记录，可以根据你所需要用的DEAE52的量适当放大，缩小。

DEAE-52再生方法：

1.一般而言，只需用高盐洗至，电导（为电阻的倒数）达到1.0左右即可，约0.35M的NaCl。

2.提供一个较高效的再生柱子的方法。0.1M Na3PO4-0.2%Triton X-100，用于蛋白较杂，柱子污染较严重时。

问： 还想问问用酸（碱）处理后水洗我要洗好久才能吸到中性，就酸碱处理一次就要6个小时的样子，这是正常的吗？

答： 0.1％叠氮钠缓冲液的叠氮钠缓冲液，中的缓冲液一般缓冲液均可，一般用层析时的初始缓冲液，我们用的是0.0M 的Tris-HCl从未出现过问题。已用此方法保存了柱子一年，其间一直在使用。

柱子再生的方法有两类，1.是将整个柱子洗下来，然后再表面活性剂，NaCl，酸碱处理，这种处理方法比较费时，当然也比较彻底，现在这种方法用的比较少，除非柱子污染比较严重；现在通常的方法是2.在柱子用后直接处理，常用的洗涤液中可含有：NaCl、6M或8M 脲、有机溶剂（如醇类等）、表面活性剂等。

我给你的第二种方法应该是一种比较强的再生洗涤液，这个方法也是我最近查文献查的，因为我近来的这个实验中发现高盐洗涤不彻底，所以查到了这个方法，洗涤后要用大量的水将其中的表面活性剂去除，然后再用上柱起始缓冲液平衡。

布氏漏斗应该不贵，关键是还得有真空泵才行，想办法借一个真空泵吧，好多实验室都有。 (责任编辑：大汉昆仑王)