实时无标记细胞分析技术（RTCA）常见问题解析（一）
昊诺斯
身在实验室中的您，RTCA 实验做了很多，操作越来越娴熟，实验曲线也越来越漂亮，当沉浸在实验成功的喜悦中时，是不是也有对 RTCA 技术的些许疑惑和问题？不用担心，下面昊诺斯就马上为您奉上丰盛的 RTCA 技术 FAQ 套餐，将您心中的问题一网打尽！
技术原理篇
Q: 什么事实时无标记细胞功能分析技术？
A: 艾森实时无标记细胞功能分析技术（RTCA）整合了微电子技术、细胞生物学和分子生物学。技术的核心是微电子生物感应芯片，这些芯片整合在细胞培养板的孔中，使得细胞功能分析仪无需任何标记就可以实时检测活细胞的活性。实时无标记细胞功能分析仪可以简单、可靠地检测到细胞的参数，比如黏附力、伸展、生长、死亡，甚至特异的形态改变。
Q: 实时无标记细胞功能分析仪衡量的什么？
A: 活细胞与检测板孔中微电极相互作用，产生电阻抗的改变，系统用我们自主开发的计算方法，将这些信号转化为特定的参数——细胞指数（Cell Index）。细胞指数很好地衡量了细胞的状态——生长、扩散、形状改变、死亡、应激等。细胞指数已经被多家杂志评论并采纳。
Q: 什么是细胞指数（Cell Index）？如何计算出来的？代表的意义是什么？为什么不直接显示阻抗值？
A: 细胞指数是一个无量纲的参数，由RTCA测得的阻抗值通过标准公式推算获得。
细胞指数指示检测孔中的细胞活性，做为细胞表型的综合检测指标，细胞指数的变化反映了细胞的数目、形态、粘附及大小的综合变化。
由于每个检测孔分布的位置不同，阻抗值的检测也有一定的差异，由阻抗值推算的细胞指数可以去除阻抗的本底差异，保证细胞指数反映的是检测细胞的活性和状态。
Q: 细胞指数（Cell Index）反应的是哪些信息？不同的特征曲线之间及同一曲线不同的时间段所代表的生理意义如何进行区分？
A: 细胞指数反应的是细胞数目和细胞粘附状态的变化，细胞数量越多，细胞指数越大，而细胞贴壁状态的变化也会影响细胞指数的变化，如细胞贴壁后铺展开，细胞指数也会增大，或是细胞受到刺激后产生收缩等反应，都会影响到细胞指数的变化。
不同的特征曲线表示的是不同细胞所特有的贴壁，铺展，增殖的状态，或是某个细胞在不同的刺激条件下特有的反应状态的变化。
同一曲线不同的时间段则代表了细胞在不同时间段内的特殊状态，如加入细胞后的初期，是细胞贴壁及铺展时的特殊曲线，后面一段时间则是细胞处于对数生长期的特殊曲线，加入了一定刺激后的曲线则是反映细胞对该刺激的应激变化的特殊曲线。
Q: 这些电阻抗信号是不是会以某种方式影响细胞？
A: 不会。RTCA 的检测电压为 22mV，而通常的细胞生物电可以达到 70mV 。同时，我们的大量验证实验也证明了电场对细胞及检测没有影响。
Q: 电流对细胞是否有影响？
A: 电极上实际存在的电流非常的微弱，只有几十至几百微安，经过长时间各个方面的验证，其对细胞的生长不会产生明显的影响
仪器知识篇
Q: 主机长时间放于培养箱内会不会影响培养箱内的环境？如何保证无菌？
A: 不会，RTCA 分析仪在生产过程中经过特殊处理，并且经过公司内部的测试，对培养箱内部的环境不会产生明显的影响。要保证其无菌只需要按照培养箱正常的清洁维护程序进行，定期的清理培养箱的同时对分析仪进行表面清洁即可。
Q: 培养箱内的湿热环境是否会对主机上的检测针造成腐蚀，如何避免？
A: 正常的培养箱内湿热环境对检测针的腐蚀是非常小的，若外界或培养箱中存在比较特殊的腐蚀物质则有可能对仪器产生一定的腐蚀作用。
要想避免腐蚀作用首先要尽量保证实验室和培养箱中有比较正常的环境；其次要避免在实验过程中将液体洒出来溅到检测针上，若发生类似情况，请第一时间对针进行清洁；第三是要定期使用仪器配套的清洁工具对针进行清洁，若有由于液体溅落或是异常环境影响导致接触不良的针，需要及时更换。
另外，也可在不使用仪器时将电阻板安装在仪器上，避免湿热环境和针的直接接触。
Q: 细胞与 E-plate 底部电极之间是否直接接触？
A: 是的，细胞会贴在 E-plate 底部电极上生长，细胞在电极上生长引起阻抗增加，从而获得信号。
Q: E-plate 孔内培养溶液中的离子是否对底部电极有影响？
A: 有一定的影响，不同的离子会有不同的阻抗，因此我们会在加入细胞之前先添加培养基测定基线，即先将该细胞使用的培养基的信号定为 0，以去除影响。
Q: E-plate 电极板底部采用的的玻璃板材料与常规培养用细胞板采用的塑料板有何区别？
A: E-plate电极板使用的玻璃材料和常规细胞培养板使用的塑料材料，都同样具有生物相容表面，我们经过特殊的处理，使玻璃板表面的细胞贴壁及生长情况达到与常规细胞培养板的塑料板表面基本一致。
Q: E-plate 检测板可以重复使用吗？
A: 跟传统细胞培养板一样，他们是不重复使用的。
Q: E-plate 检测板可以用不同的基质处理吗？
A: 可以。平板可以用任意基质，比如多聚赖氨酸或纤粘连蛋白等覆盖，以加强或者防止细胞黏附。
Q: 当我可以购买便宜的塑料平板并获得一样结果的时候，为什么我要使用 E-plate 检测板？相对于标准滴定板技术，为这个系统付出的成本是否值得？
A: 艾森生物提供用户很多节省成本的机会。第一，该细胞功能分析仪不需要昂贵的标记，也不需要昂贵的光学系统。这对于大多数实验室来说都是很大的节省。第二，因为 E-plate 检测板连续自动地读取，劳动力需求就大大减少了。此外，实验过程可以获取大量完整的生物学信息，而现行的系统是不可能完成的。
Q: 不同孔的测量是独立的吗？
A: 是的，每个孔都是采取有序的方式独立测量的，实时无标记细胞功能分析仪检测的相当于是所有微孔底部表面。另外，孔与孔之间的精度和准确度也很高。在我们实验室，我们通常能够获得孔与孔之间 CV（变异系数）小于 10％。
Q: 细胞如何黏附在微孔底部？
A: 细胞黏附在微孔底部平坦的微金电极上，这些微金电极覆盖底部 75％ 的表面。实时无标记细胞功能分析仪的所有组件都是非生物排斥的， E-plate 检测板经过消毒和组织培养处理。艾森生物广泛的质量控制过程保证用户使用 E-plate 检测板实验结果的一致性。
Q: 不同批次的E-Plate 板，在细胞种类和接种量等参数一定时，实验是否能有良好的重复性？
A: 在细胞种类和接种数量一定时，若细胞代数，细胞状态等条件也基本保持一致，则可以出现比较良好的重复性。
Q: 用 E-Plate 检测后的细胞还能做其他实验吗？
A: 可以，由于 RTCA 技术是无标记无创伤的技术，对于细胞没有任何损害，所以检测后的细胞可以用来进行其他实验。
Q: E-Plate板可用酶标仪检测吗？
A: 不可以，E-Plate 板底面有金电极不易透光，因此不能直接用酶标仪检测，可以将孔中的液体吸入常规细胞培养板中再用酶标仪检测。
Q: 可视窗口在哪里？有什么用途？
A: 可视窗口在 E-Plate 板孔的正中间，主要是为了方便显微镜下观察细胞的状态。
