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基于阻抗的rtca细胞分析技术应用-检测GPCR细胞信号动态

&蔼可芯昂生物仪器(上海)有限公司

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基本原理:将细胞样本置于阻抗板中(底部埋入电极的96孔培养板)进行培养,当细胞贴附于电极并伸展开后,将微小的电信号施加于电极上,细胞间形成的联接将阻挡这些电信号的通过,导致阻抗值的读数增加,而细胞结构形态上的细微改变(比如源于受体介导的信号传递或细胞形态学变化)也会影响阻抗值。也就是说,细胞的贴壁、黏附、增殖及形变等过程都会引起阻抗的变化,细胞的增殖数量与阻抗呈现一个正相关的关系。

阻抗检测会计算有多少电信号(上图中青色箭头所示)被电极-细胞的界面所阻挡。当电极未被覆盖时,电信号能轻松穿过,这时阻抗值比较低。当细胞盖住电极时,能够通过的电信号就变少了,相应的阻抗值就会增大。当细胞死亡或者脱离电极时,阻抗值就会恢复到基线水平。

应用:实时无标记、长时间连续监测GPCR细胞信号动态

当细胞外信号分子与细胞表面的受体结合时,会激活细胞内的信号通路并影响细胞的行为。这些微小的变化通常发生得很快,但可能会持续几分钟到几小时,并伴随着显著的生理状态改变。利用基于阻抗的细胞分析平台,可实时、连续、无标记地监测细胞生理表型。揭示受体介导信号的动力学,以便我们更好地理解GPCR机制。

-实时监测受体介导的快速信号传导


GPC是跨膜受体中数量最多的一类。 GPCR的激活往往引发细胞的构象变化。基于此现象,我们可以通过阻抗测量来检测GPCR的激活。

Calu-3 细胞被接种到 CytoView-Z 板中,并在 Maestro Z 系统上连续监测阻抗,跟踪Calu-3细胞对异丙肾上腺素、组胺和细胞松弛素d的动态反应,并揭示每种化合物的细胞反应动力学的重要信息。


实验的一般流程:


基于阻抗检测的细胞分析技术,使得实时、不间断且无需标记的细胞监测成为可能。对数据流的后续分析可以揭示细胞间互作和细胞-药物反应的动力学,可以更好地理解其机理而无需做费时费力的多次终点法实验。目前阻抗平台可用于细胞增殖、肿瘤免疫、细胞毒性及活力检测、药物筛选、信号通路(GPCR/CFTR)、细胞间相互作用 (屏障功能)、病毒学研究及细胞迁移等细胞表型研究。

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