基因敲除阳性克隆筛选试剂优选Cruiser™

近年来，ZFN、TALEN、CRISPR/Cas9等基因组编辑技术可谓是层出不穷，尤其是CRISPR/Cas9，一出现便在全球范围内掀起一股热潮。同时，各大公司也开发出一系列相应的产品，其中一种至关重要的就是基因敲除阳性克隆筛选的试剂。

目前用的比较多的有CEL I酶，CEL I是植物来源的一种特异性识别碱基错配的酶，活性高，不会产生假阳性。

而且CEL I酶是目前生物界发现的唯一能准确切割异源双链DNA中存在错配位点的酶，在遗传学研究和应用领域中扮演重要的角色，多应用在临床诊断领域。如今市面上只有Cruiser™和Surveyor两个品牌。因为Cruiser™价格合适，且相比于进口代理产品拥有货期短的优点（国内可以2-3天内到货），做到真正质优价廉。

据了解，另一种被广泛应用于基因敲除筛选的X酶，其最早并不是为了做基因敲除筛选而生产的。它除了识别错配外，还可以识别十字型结构 DNA、Holliday 结构或交叉 DNA、异源双链 DNA，正是因为这个特点，很容易导致假阳性的现象。

图1. Holliday交叉（Holliday junction），无错配结构

近日，Cruiser™与市面上易出现假阳性的X错配酶，进行比较，实验结果见下：

下图为3T3细胞FADD基因敲除，已知在3T3细胞中FADD基因的敲除效率很低（其敲除pool测序无双峰），挑24个单克隆后经X酶切结果显示如图2，而经Cruiser™酶切结果显示如图3

图2 3T3细胞FADD基因X酶检测电泳图

图3 3T3细胞FADD基因Cruiser™检测电泳图

P1—Cruiser™酶切阳性对照
P2—X酶切阳性对照

结论：如上图结果显示，X酶的假阳性率达90%以上（图2中clone7与22除外），而Cruiser™的酶切结果，与敲除pool测序无双峰的结果相符合。